【摘 要】
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目的:构建鼠ING4(mING4)基因的腺病毒表达载体(Ad- mING4),研究Ad- mING4对人肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用。方法:利用本室已构建的pcDNA3.0-mING4质粒为模板进行PCR,,将
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目的:构建鼠ING4(mING4)基因的腺病毒表达载体(Ad- mING4),研究Ad- mING4对人肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用。方法:利用本室已构建的pcDNA3.0-mING4质粒为模板进行PCR,,将目的片段用KpnI和EcoRV双酶切后连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-mING4与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-mING4经pacI线性化后转染QBI-293A细胞;收获病毒重组子;经RT-PCR鉴定。将获得的重组病毒子感染人肝癌SMMC7721细胞。然后分别用RT-PCR、流式细胞仪、MTT法及Western Blot等方法鉴定mING4基因的表达和研究其对SMMC7721细胞生长的抑制作用。结果:pAdTrack-CMV-mING4经双切酶后可见750bp大小的DNA片段,与理论预测的结果相符,测序结果与GenBank报道的序列相比,除有一个碱基有同义突变外其余均一致。结果显示腺病毒载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-mING4(Ad- mING4)感染SMMC7721细胞后,mING4基因可在该细胞中表达,并可抑制人肝癌SMMC7721细胞生长,诱导该细胞凋亡。结论:构建了mING4基因的腺病毒表达载体,为进一步研究ING4基因抗肿瘤的分子机制奠定了实验基础。
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