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背景与目的:甲状腺滤泡癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在世界范围内呈逐年上升趋势。甲状腺滤泡癌为甲状腺癌中恶性程度较高的一种,易发生远端转移。目前,主要通过病理染色进行分型确定,还没有灵敏性好特异性高的诊断方法以及治疗和评价肿瘤预后的指标。电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)Nav1.1-Nav1.9是由α亚单位和β亚单位形成的膜蛋白,主要分布于神经肌肉细胞等兴奋性细胞中,其主要功能为介导钠离子的跨膜流动,产生和传递动作电位。最近研究表明,VGSCs在多种肿瘤中都有异常的高表达,具有促进肿瘤细胞增殖和转移等作用。然而,VGSCs在滤泡型甲状腺癌细胞中的表达、作用及其相关分子机制尚不清楚。本研究通过比较正常甲状腺细胞与甲状腺滤泡癌细胞中VGSCs的表达,分析甲状腺滤泡癌细胞表达的各种VGSCs亚型,并针对筛选确定的高表达的VGSCs亚型进一步探讨其在甲状腺滤泡癌中的作用和分子机制,以及对癌细胞药物敏感性的影响,为甲状腺滤泡癌的诊断和治疗提供新的分子靶点。方法:1.通过Real-time PCR和western blot检测正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和甲状腺滤泡癌细胞系FTC-133中Nav1.1-Nav1.9的mRNA和蛋白的表达水平。2.免疫组织荧光染色检测Nav1.6蛋白在正常甲状腺组织和肿瘤组织中的表达和定位。3.利用Real-time PCR和western blot技术检测转染Nav1.6-siRNA后,FTC-133细胞中Nav1.6的mRNA和蛋白表达水平。4.采用Real-time PCR和western blot检测生长指标,CCK-8细胞增殖实验和Ed U法检测Nav1.6-siRNA和钠通道阻滞剂(TTX)对细胞增殖的影响。5.通过Real-time PCR、western blot和明胶酶谱检测侵袭指标,transwell细胞侵袭实验分析Nav1.6-siRNA和TTX对细胞侵袭能力的影响。6.通过Real-time PCR和western blot检测干性指标,克隆形成实验检测Nav1.6-siRNA和TTX对细胞干性的影响。7.通过western blot、明胶酶谱和克隆形成实验,探讨Nav1.6-siRNA、FAK过表达和FAK抑制剂对细胞信号通路的影响。8.利用CCK-8细胞增殖实验,分析目前临床常用于治疗甲状腺癌的乌苯美司的最佳用药浓度,western blot检测凋亡指标,TUNEL、DAPI染色检测细胞凋亡功能。结果:1.Real-time PCR结果显示,在电压门控钠离子通道亚型中,与正常甲状腺细胞相比,甲状腺滤泡癌细胞中Nav1.6的表达最高。2.免疫组织荧光结果显示,滤泡型甲状腺癌中Nav1.6的表达水平高于正常甲状腺组织,Nav1.6蛋白在甲状腺滤泡癌细胞的细胞膜中表达。3.Real-time PCR和western blot结果显示,Nav1.6-siRNA转染甲状腺滤泡癌细胞,Nav1.6的mRNA和蛋白质的表达水平降低。4.Real-time PCR和western blot结果显示,干扰Nav1.6表达降低FTC-133细胞系中PCNA、Cyclin D1和Cyclin E1的mRNA和蛋白水平。CCK-8和Ed U实验结果显示,下调Nav1.6表达和钠通道阻滞剂处理后抑制了FTC-133细胞的增殖。5.Real-time PCR和western blot结果显示,干扰Nav1.6表达降低FTC-133细胞系MMP9的表达,而TIMP1和TIMP2的表达增加。transwell实验结果显示,下调Nav1.6表达和钠通道阻滞剂处理后抑制了FTC-133细胞的侵袭能力。6.Real-time PCR和western blot结果显示,干扰Nav1.6表达降低FTC-133细胞系中细胞干性标志物Nanog和SOX2的mRNA和蛋白水平,克隆形成实验表明Nav1.6表达降低和TTX处理后降低了FTC-133细胞的干性程度。7.western blot结果显示,干扰Nav1.6可降低FTC-133细胞中粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和桩蛋白(paxillin,PAX)的磷酸化水平。过表达FAK增加了FAK和PAX的磷酸化水平以及下游分子,如PCNA、Nanog和MMP9的表达,Nav1.6-siRNA和FAK抑制剂降低了这些蛋白的表达水平。8.乌苯美司(2mg/ml)可抑制FTC-133细胞增殖。western blot结果显示,乌苯美司降低FTC-133细胞系中bcl-2的表达,而增加PARP和Caspase 8活性,下调Nav1.6水平加强这种抑制作用。TUNEL检测显示,乌苯美司促进FTC-133细胞的凋亡,Nav1.6降低细胞的药物敏感性。结论:1.甲状腺滤泡癌细胞和组织中,较正常细胞和组织Nav1.6的表达水平升高。2.Nav1.6通过激活FAK信号通路促进甲状腺滤泡癌细胞的增殖、干性和侵袭能力。3.Nav1.6降低了甲状腺滤泡癌细胞的药物敏感性。