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目的:观察Mecom基因在小鼠内耳发育过程中不同阶段的动态表达特征及规律,并进一步研究Mecom基因对小鼠耳蜗支持细胞增殖及分化的影响。方法:1.内耳发育过程中Mecom蛋白的表达特征:选用胚胎第9.5天(E9.5)到胚胎期18.5天(E18.5)的C57BL/6胎鼠,利用冰冻切片及免疫荧光组织化学染色技术观察在内耳发育阶段Mecom的表达特征规律;2、腺病毒转染基底膜过表达Mecom蛋白:利用腺病毒转染技术转染基底膜,通过免疫荧光染色观察腺病毒转染率,同时利用蛋白免疫印迹实验及实时荧光定量PCR实验进一步检测Mecom在基因及蛋白水平的表达变化;3、过表达Mecom基因对耳蜗支持细胞的增殖及转分化的影响:利用新生鼠耳蜗毛细胞损伤模型,过表达Mecom基因后,利用免疫荧光染色及qPCR实验观察上调Mecom基因对内耳支持细胞的影响。结果:1.内耳发育过程中Mecom蛋白的表达特征:在E9.5天时,未在听泡及其周围组织观察到Mecom蛋白的明显表达,当胚胎发育到E10.5天时,Mecom蛋白开始在感觉上皮周围弱表达,其局限表达于听泡周围的间充质;E11.5时期Mecom的表达增强但也局限于内耳周围的间充质;E12.5时期时感觉上皮中开始出现Mecom的表达,但随后即消失,仅在这一时期的感觉上皮中一过性表达,E13.5后,Mecom表达逐渐减弱至消失。2.腺病毒转染基底膜过表达Mecom蛋白:建立新霉素新生鼠基底膜毛细胞损伤模型后使用1X10~9滴度的腺病毒(Ad-Mecom-GFP)转染;顶圈中,对支持细胞感染效率为7.2±4%(n=4),对毛细胞转染率为30.7±2.7%(n=4);中圈中,对支持细胞感染效率为50±3.3%(n=4),对毛细胞转染率为2.1±1.9%(n=4);底圈中,对支持细胞感染效率为42±6.3%(n=4),底圈未见被腺病毒转染的毛细胞。新生鼠内耳基底膜实时荧光定量PCR实验结果显示:与对照组Ad-EGFP腺病毒转染基底膜相比,Ad-Mecom-EGFP腺病毒转染基底膜后的Mecom的mRNA表达水平明显升高,P<0.01;新生鼠内耳基底膜Western Blot实验结果显示:与对照组Ad-EGFP腺病毒转染基底膜相比,Ad-Mecom-EGFP腺病毒转染基底膜后的Mecom蛋白表达水平显著升高。3.过表达Mecom基因对内耳支持细胞的影响:过表达Mecom基因后,基底膜中Sox2+/Edu+细胞数占Sox2+总细胞数比例在顶圈及中圈较对照组明显升高,且具有统计学意义;同时在基底膜中圈中发现Myo7a+/Edu+双阳性细胞,即新生鼠基底膜过表达Mecom基因后在中圈出现支持细胞的转分化;qPCR结果显示,过表达Mecom后Wnt下游基因Axin2及Sp5转录水平明显上调;Notch信号通路相关基因Hey1及Hes1转录水平明显下调;TGF?/BMP信号通路相关基因Cdkn2b及Smad3基因转录水平明显下调。结论:Mecom仅在E12.5天出现于小鼠内耳感觉上皮内,其表达具有明显时限性以及区域性。上调Mecom基因后,促进顶圈及中圈的支持细胞重新进入细胞周期进行有丝分裂后增殖,且诱导中圈的支持细胞转分化,其机制可能是通过Wnt、Notch及TGF?/BMP信号通路调控支持细胞的增殖及转分化过程。