论文部分内容阅读
目的制备Angiopep-2修饰核/壳结构介孔二氧化硅脂质囊纳米粒(ANG-MSN-LP),运载抗癌药物紫杉醇(PTX),以期达到脑靶向递药和提高对脑胶质瘤的治疗效果,为脑靶向制剂的设计、开发与评价提供重要的理论和实践参考。方法选用HPLC建立PTX的含量分析方法;采用改良的经典Stober法制备介孔二氧化硅纳米粒(MSN),通过热重分析法、氮气脱吸附法、XRD衍射等技术进行表征分析;发明反复饱和溶液吸附法制备载入PTX的MSN(MSN-PTX),然后以MSN-PTX为核,运用自组装和薄膜水化法构建核/壳结构的Angiopep-2修饰介孔二氧化硅脂质囊纳米粒(ANG-MSN-LP-PTX);透析袋法考察体外释药特性;MTT法考察空白载体对HBMEC和C6的细胞毒性,以及载药纳米粒对C6细胞的抗肿瘤作用;建立体外BBB模型研究载体对PTX的跨膜转运能力和对C6细胞周期的影响。建立荷脑胶质瘤大鼠模型,对肿瘤组织进行病理切片观察脑胶质瘤的侵袭情况,考察载药纳米粒对荷脑胶质瘤大鼠治疗作用;采用血-脑同步微透析技术,考察载药纳米粒在血液和脑组织中的药动学特性。结果 MSN 粒径为 94.61±3.91 nm(PDI 0.085±0.01),比表面积(SBET)为 425 m2·g-1,孔容积(Vp)为0.37 cm3·g-1,孔径35 A。MSN在PTX的饱和溶液中反复吸附7次时达到平衡,载药量高达11.1%。ANG-MSN-LP-PTX分布均一,无团聚现象,具有明显的核-壳结构,粒径 106.37±3.76 nm(PDI 0.14±0.02),并且在0～10 ug·mL-1 范围内对 HBMEC和C6细胞具有良好的安全性和生物相容性。ANG-MSN-LP-PTX体外释药48 h内的累积释放率达到75.5%,突释现象降低,具有缓释特性;跨膜BBB转运12 h后,对PTX转运率高达10.74%;在细胞周期实验中,使C6细胞滞留在G2-M期细胞数比例为40.92±6.20%,显著高于各对照组数倍。荷瘤大鼠中脑胶质瘤对正常脑组织侵袭严重,模型大鼠两周后可见伴随着体重减轻,精神萎靡,食欲不振,后期左后腿偏瘫;给药17d后,ANG-MSN-LP-PTX、MSN-LP-PTX、MSN-PTX、PTX溶液和生理盐水组的肿瘤体积分别为 4.52 mm3、7.70 mm3、19.47 mm3、23.01 mm3和57.11 mm3。生存周期实验,生理盐水,PTX溶液,MSN-PTX,MSN-LP-PTX和ANG-MSN-LP-PTX组大鼠的中位生存时间(MST)分别为 16.83±1.32,18.50±1.37,19.83±1.94,23.66±2.25 和 26.83±2.22d。血-脑同步微透析实验表明,MSN-LP-PTX和ANG-MSN-LP-PTX具有较长的循环时间,血液中平均保留时间(MRT)分别为9.47 h和10.61 h,脑内MRT分别为4.78 h和6.23 h,均显著高于PTX溶液;ANG-MSN-LP-PTX的AUCblood是PTX溶液的2.85倍,但是ANG-MSN-LP-PTX 的 AUCintraceebral为PTX 溶液的 5.29 倍。MSN-PTX 和 PTX 溶液的PTX药时曲线符合静脉给药的二室模型,然而MSN-LP-PTX和ANG-MSN-LP-PTX的却符合口服给药的二室模型,脂质囊包裹改变了 PTX的药动学特性。结论本论文制备的MSN表面圆整光滑,粒径分布均匀,比表面积大,孔径均一,性质稳定;反复饱和溶液吸附法可有效提高药物载药量,解决纳米载体载药量低的问题,值得应用和借鉴;所构建的ANG-MSN-LP载体系统,融合了介孔材料和脂质材料的优点,同时解决二氧化硅易团聚、易突释的问题和脂质体载药低、易漏药的问题,是一种安全、可靠、有良好生物相容性的纳米粒,经Angiopep-2修饰后的二氧化硅脂质囊纳米粒可以有效的透过血脑屏障,实现脑靶向递药,其作为一种优良的递药载体并有望应用于脑胶质瘤的治疗;本论文改进的体外BBB模型,将HBMEC和C6脑胶质瘤细胞通过trans well嵌套共建了双细胞模型,体外考察递药载体透过BBB后对脑胶质瘤细胞的抑制作用,较为逼真模拟递药载体在体内的运行过程,具有较高的科学性;血-脑同步微透析技术研究脑靶向递药系统的药动学特性,能够同时和实时的测定脑内和血液内的游离型药物的浓度,准确考察药物的药动学特性,具有无可比拟的优势。