蓝果忍冬果实转录组测序及花青素合成关键基因的研究

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蓝果忍冬(Lonicera caerulea L.)又名蓝靛果,为灌木类小浆果,耐寒性极强,主要分布在半球的寒带浆果带,北美和北欧各国。我国主要分布在吉林省长白山、黑龙江省大兴安岭东部山区、黑龙江东部(勃利县境内)以及内蒙古、青海、甘肃、宁夏、新疆等地,是一种北方特色小浆果,具有很高的经济价值和营养保健价值。蓝果忍冬果实中花青素含量丰富,高于一般水果,转录组测序技术可以对试验材料在特定的时间和空间进行分析,同时也填补了基因组缺乏的空缺。本研究对不同品种蓝果忍冬成熟果实内花青素进行了定性与定量测定,分析了总花青素与抗氧化性之间的相关性,选取了花青素含量高的蓝果忍冬品种蓓蕾作为测序材料,应用Illumina Hi SeqTM 2000平台对其果实不同生长时期(绿熟期和转色期)进行转录组de novo测序,通过对花青素含量,花青素合成基因及转录因子的表达联合分析,初步探讨了蓝果忍冬果实中花青素合成的过程,材料结果如下:(1)利用HPLC-DAD-MS2定性定量分析了蓓蕾,HSY-4和日本-5不同品种的蓝果忍冬果实花青素成分,在525nm波长检测到8种花青素成分,其中蓓蕾的花青素含量最高,达到500.14±62.43mg/100g FW,日本-5最低,为162.79±3.75 mg/100g FW,8种花青素中矢车菊3-O-葡萄糖苷含量最高,约占总花青素的76.61-86.67%。(2)对3个品种的蓝果忍冬成熟期果实做了抗氧化性分析(DPPH,FRAP,TPC,SOD),分析结果均表明蓓蕾的抗氧化活性最高,日本-5的抗氧化活性最低,果实总花青素含量与果实抗氧化性呈正相关,花青素含量越高,果实抗氧化活性越强。(3)利用Illumina Hi Seq TM 2000平台对蓓蕾果实绿熟期和转色期两个时期进行de novo转录组测序,总共组装得到66,610条All-Unigenes,通过与网上可用的公共数据库(NR,Swiss-prot,KEGG,COG和GO)比对注释,43,202 All-unigenes(64.86%)与已知蛋白显示高度的相似性。(4)利用荧光定量PCR技术对蓓蕾品种的幼果期,绿熟期,半转色期,转色期,软化期5个时期进行花青素合成相关基因及转录因子的表达量分析,结果表明在5个时期中,半转色期花青素合成基因表达量最高,与花青素积累过程相符,PAL,ANS,b HLH基因表达丰度最高,在花青素合成过程中起关键作用。(5)利用荧光定量PCR技术对3个蓝果忍冬品种的绿熟期和转色期进行花青素合成相关基因表达量分析,整体来看,3个品种表达模型相似,但品种间有差异,基本可以解释蓝果忍冬果实花青素合成过程。
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