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目的ATP1A1属于Na+/K+ATPase酶家族之一,ATP1A1过表达已在多种癌症中有所报道,包括食管癌、黑色素瘤、肝癌等。据报道它在与癌症相关的各生物学过程起到关键作用,而沉默ATP1A1后对肿瘤的生长、转移抑制也有所报道,但尚未见在胶质瘤的侵袭性方面有单独报道。为了证明这一假想,我们借助RNAi(RNA干扰技术),定向沉默胶质瘤U251细胞的ATP1A1基因,观察细胞增殖、迁移、侵袭以及成瘤能力的改变,并探讨MMP-2/9(基质金属蛋白酶2/9)表达的调节是否为其关键的作用靶点。方法构建ATP1A1/sh RNA质粒三对和阴性对照一对,通过三质粒系统包装慢病毒并转染U251细胞系从而抑制ATP1A1基因的表达。通过嘌呤霉素筛选,获取嘌呤霉素抗性单克隆进行培养,扩增后分别用免疫荧光技术观察荧光量,RT-q PCR(实时定量PCR技术)和Western blot(免役印迹技术)各自检测ATP1A1 m RNA和蛋白的表达,从而验证获得的稳定转染细胞株。后续实验分为空白组、对照组、实验组。空白组:未作任何干预的U251胶质瘤细胞,对照组:空载质粒转染的U251胶质瘤细胞,实验组:选出沉默效果最佳的一组。MTT法观察细胞体外的增殖能力,细胞划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell小室观察细胞的侵袭能力,裸鼠皮下成瘤观察体内成瘤能力,Western blot检测MMP-2、MMP-9的表达。结果经转染和嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下见有明显表达抑制ATP1A1基因的细胞,RT-q PCR、Western blot分别检测稳定株ATP1A1的m RNA和蛋白表达,均显著降低(P<0.05),通过RNAi技术成功建立U251低表达ATP1A1的稳定株。与对照组相比,实验组细胞的增殖和迁移、侵袭以及成瘤能力也显著受抑(P<0.05);MMP-2和MMP-9的表达也明显降低(P<0.05)。数据有统计学意义。结论靶向沉默ATP1A1基因能够明显抑制胶质瘤U251细胞的体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤性,其机制可能与MMP-2、MMP-9的下调相关,ATP1A1可能作为胶质瘤治疗的一个潜在靶点。