IDO基因稳定转染HepG2细胞系的建立

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目的:IDO可通过降解局部组织中的色氨酸来调节T细胞免疫,从而介导肿瘤的免疫逃逸。建立稳定转染IDO基因的HepG2细胞系,以探索及研究该基因的功能,为进一步研究IDO基因在肝癌免疫逃逸中的作用奠定基础。方法:进行预实验制定合适的G418筛选浓度、维持浓度,应用脂质体将真核细胞表达质粒pcDNA3.1-IDO和空载质粒pcDNA3.1转染入HepG2细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,用逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证获得的表达细胞株。结果:预实验筛选浓度确定为800ug/ml,维持浓度为400ug/ml; RT-PCR检测显示:pcDNA3.1-IDO转染组成功扩增出464bp的目的基因片段,pcDNA3.1转染组及未转染组未能扩增出片段;Western Blot检测显示,质粒pcDNA3.1-IDO稳定转染的HepG2细胞表达IDO蛋白,而质粒pcDNA3.1稳定转染HepG2细胞与未转染的HepG2细胞则不表达IDO蛋白。结论:pcDNA3.1-IDO质粒体外稳定转染人肝癌细胞HepG2,可以有效地使IDO基因在RNA水平和蛋白水平表达都增高,成功建立了稳定转染基因IDO的HepG2细胞系,为进一步探讨该基因的功能奠定了一定基础。
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