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女性生殖系统的调节为人体最复杂的调控系统之一。早在1950年,人们已发现人类女性的生殖功能与营养状态密切有关,营养不良或营养过剩均可造成月经失调,但内在机理一直未能探明。1994年Zhang等利用定位克隆技术首次成功地克隆了小鼠的肥胖基因(ob)与人类的同源序列,随后人们把ob基因的编码产物命名为leptin(瘦素)。已证实leptin为167个氨基酸、分子量为16KD的蛋白激素,其合成与分泌部位主要在脂肪组织。它作为营养状态的外周传入信号作用于下丘脑,参与调节脂肪储存和能量代谢。随着有关leptin研究的深入,leptin与生殖的关系也日益倍受关注。研究发现ob基因突变的小鼠其生殖功能丧失,同时伴有极度肥胖,经leptin治疗后,不仅体重减轻,而且生殖功能恢复。在人类人们发现ob基因突变的患者极其罕见,但在罕见的患者中,发现其激素水平处于低促性腺激素、低性激素状态。由此,Barash提出了leptin为生殖系统的代谢信号,即当体内的营养状态达到一定的临界水平,足以满足生殖需要时,leptin能启动下丘脑-垂体-卵巢轴触发青春期的开始。国外研究表明,下丘脑、垂体、卵巢均有leptin受体(leptin R)表达;leptin能刺激下丘脑神经细胞释放LHRH、刺激垂体细胞分泌LH和FSH,故普遍认为leptin通过与下丘脑-垂体-卵巢轴间接调节卵巢功能。 相对而言,leptin对脂代谢、能量代谢的作用研究国内外报道较多,也较系统;而对生殖系统的作用研究国外报道较少,更未经过系统的研究,其研究方向也着重于下丘脑、垂体,有关卵巢的研究较少或颇有争议;至于leptin是否直接作 浙江大学硕士学位论文用于卵巢、卵巢是否分泌leptin以及leptin是否影响卵泡发育迄今尚不清楚。国内关于Ieptin在生殖调节中的作用研究迄今未见报道。 本课题对 leptin参与生殖调节的机制从以下二方面进行探索:厂)测定自然周期和超排卵周期血清leptin的浓度变化和排卵前卵泡液的leptin浓度,探讨!eptin在自然周期中的生理水平、促排卵对!eptin浓度的影响以及leptin对IVF结局的可能影响。()从分子生物学水平研究卵巢颗粒细胞 leptin R mRNA异构体的表达和Ieptin mRNA的表达,以探索 leptin对卵泡发育的调节途径。 材料与方法 本研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测12例正常生育年龄女性志愿者周期第 3大(月经期)、周期第门大(增生晚期)、周期第 23大(黄体期)血清中卜…h水平:同时选择IO例月经周期规则、因于宫肌瘤或输卵管结扎术后需进腹手术的生育年龄妇女,测定其排卵前卵泡液和同期血清的leptin水平;选择39例因输卵管因素而采用长周期方案的IVF-ET患者,采用ELISA和放射免疫法分别检测患者在注FSH前、注HCG前及注HCG后36小时血清和卵泡液(卵泡直径> 18mm)的 lePtin、E。水平,详细记录患者使用促性腺激素的累计剂量、获卵数、成熟卵数、受精率、*T的胚胎数以及胚胎评分:采用*T.**R法测定颗粒黄体细胞leptin mRNA和 leptin R mRNA异构体的表达。所有数据用 SPSS 9刀 forWlldOWS软件包处理。 结果 在自然周期中,血清 leptin浓度在增生晚期(6.4土l.9 "g/ml)和黄体期(8二土2.4…ml)明显高于月经期(4.9士1.7 n旮ml),P分别功刀5和0刀01:排卵前卵泡液的!eptin浓度(10.8土 1.4 "g/ml)和同期血清的 1印tin浓度(7石士 1二 "g/ml)相比无显著性差异,P>0刀5。在超排卵周期中,血清!eptin水平在注HCG前 (26*士2.3 "g/ffil)明显高于注 FSH前(9.3士1刀 "g/ml)和注 HCG后 36小时(15.8士2.3 "g/ml),P均<0.001;卵泡液(18.5士2二 "g/ffil)和同期血清门.8士2.3 "g/ml)的 leptin水平比较无显著性差异,P>0刀5;超排卵周期的卵泡液和同期血清一tin水平明显高于自然周期的卵泡液和同期血清一tin水平,P<0刀5;采用直线相关分析显示,从注HCG前至注HCG后36 .J’时血清leptin浓度的差值与获取的成熟卵个数负相关,,-0.396,P<0刀5;FSH用药总量与卵泡液内 EZ/12ptifl比值 7———— 浙江大学硕士学位论文一负相关,,0.379,P<0刀5。分析leptin水平与IVF结局的关系,发现妊娠组的卵泡液和同期血清的1e…n水平门 土1.8 11乡1和8.7士1.5 fi旮ml)明显低于非妊娠组卵泡液和同期血清的 lePtin 7K平(20.8土2.7 "g/ml和 18.3士2.9 "g/ml),P<0刀5。妊娠组的卵泡液和同期血清卜在b水平分别与自然周期组的卵泡液和同期血清 leptin水平比较无显著性差异O列刀5)。RTPCR显示卵巢颗粒细胞有ICptin mRNA禾 lePtin R mRNA三种异构体的表达。 结论 1.正常生育年龄妇女血清 l叩n浓度随月经周期发?