肿瘤抑制因子p53与核受体辅激活因子SRC-1之间相互作用的研究

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p53是一种肿瘤抑制因子,可以调节下游靶基因的转录活性,从而激活或抑制其转录。正是由于p53的这一功能,它需要与许多蛋白产生相互作用。涉及包括与细胞生长,存活,程序性细胞死亡等相关生命活动的基因的调控。SRC-1是一种核受体辅激活因子,参与染色质重塑,解凝,并对核受体转录调控起重要作用。由于SRC-1与核受体之间的相互作用使它在调控新陈代谢方面具有重要作用,例如控制脂肪生成,调控饱和脂肪酸储存,调节葡萄糖代谢等。为研究p53与SRC-1之间的相互作用,探索p53对SRC-1在体内表达是否具有某种调控作用并找出调控的方式。本研究通过分子克隆手段构建p53和SRC-1不同片段的表达载体,并通过Alpha Screen生化实验发现p53(5-293)和SRC-1(105-385)在体外存在相互作用,然后通过Pull Down实验,亲和层析实验进一步验证。体内细胞实验中,发现p53蛋白对SRC-1蛋白表达有抑制作用,通过蛋白合成抑制剂,蛋白酶体抑制剂和自噬抑制剂处理细胞,发现p53是通过某种泛素化酶对SRC-1进行转录后调控,使SRC-1蛋白被显著降解。接着通过免疫共沉淀和蛋白质印迹验证了它们相互结合的区域,并缩小相互作用区域的范围。本文通过体外和体内实验证明了 p53可以与SRC-1相互作用,首次发现p53可以通过泛素化途径使SRC-1蛋白降解,并确定它们之间相互结合的具体区域,对进一步研究p53和SRC1这两种蛋白相互作用的机制具有非常重要的意义,同时也为今后对这两种蛋白在信号通路和生理功能方面的探究提供了新思路。
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