目的：采用流式细胞术和蛋白印迹法观察砷对原代培养海马神经元是否发生凋亡，及其作用机制。　　方法：⑴离体培养新生24h内SD乳鼠海马神经元，每天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察；⑵MTT法检测培养不同时间段神经元的活力变化，并绘制生长曲线；⑶离体培养新生24h内SD乳鼠海马神经元，取纯化培养9d神经元利用免疫荧光染色法检测β-tublinШ的表达率；⑷离体培养新生24h内SD乳鼠海马神经元，取培养2、4、8、12、16、20、24d海马神经元，蛋白印迹法检测MAP-2蛋白的表达变化；⑸以不同浓度三氧化二砷（0、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）染毒24小时，MTT法检测不同浓度染毒组对神经元活力的影响；⑹流式细胞仪（Annexin V-FITC/PI双染法）定量分析各实验组凋亡率；⑺测定各组神经元中超氧化物歧化酶（SOD)、乙酰胆碱酯酶（TChE)活性和丙二醛(MDA)含量；⑻Western blot方法检测各实验组内海马神经元中Bcl-2和Bax蛋白表达的含量。　　结果：①倒置相差显微镜下原代培养的海马神经元，刚分离种植时可见神经细胞为圆形，6～8 h内多数细胞开始贴壁，24 h后绝大多数神经细胞贴壁，3d细胞聚集成团，突起增大、增粗，培养5~7d神经元胞体丰满，晕光形成，突起增粗、增长交织成的网络更密集。培养14-16d后，神经元开始退化。以Neurobasal培养基（含2％B27）培养神经元生长好形态清晰。②原代海马神经元生长曲线测定显示，海马神经元体外培养条件下经历了生长潜伏期(2~4 d)，对数生长期(4~8d)，后进入生长平台期(8~14d)，细胞生长处于停滞状态。③经神经元特异性标记物β-tublinШ单克隆抗体和DAPI荧光染色后在荧光倒置显微镜下鉴定，计算海马神经元纯度为93.0%±2.5%，能够满足下一步的实验要求。④经蛋白印迹鉴定结果显示分别在2、4、8、12、16、20、24d中均可发现MAP-2蛋白。⑤MTT法检测结果显示三氧化二砷对神经元细胞有一定的细胞毒性，细胞存活率在24h时间点随着染毒剂量的逐渐增加而下降，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01)。⑥流式细胞仪检测凋亡率显示，各浓度组处理24h对海马神经元凋亡率的影响具有显著差异（P<0.01），各浓度组同对照组比较，凋亡率随浓度的增加而增加。⑦与对照组比较，各染毒组S0D和TChE活性显著降低(P<0.01)，MDA含量显著升高(P<0.01)，具有明显的剂量效应。⑧Western blot分析显示同时随着染毒剂量的增加，Bcl-2蛋白表达逐渐降低，Bax蛋白表达显著增多，Bcl-2/Bax的比值逐渐减小。　　结论：⑴原代培养海马神经元免疫荧光细胞化学染色为β-tublinШ阳性细胞，纯度为93.0%±2.5%；⑵砷对培养的海马神经元有直接毒性作用且呈剂量-时间依赖关系；⑶砷可通过Bcl-2与Bax途径诱导凋亡，并随剂量增加凋亡加重。