论文部分内容阅读
声学造影评价木樨草素对高脂饮食大鼠肾脏微循环的影响 目的: 木犀草素( Luteolin),化学名3',4',5,7-四羟基黄酮,属天然弱酸性四羟基黄酮化合物,多以糖苷形式存在于多种植物中,可通过抗氧化、抗炎等方面的作用,减轻机体重要脏器在血液再灌注过程中产生的损伤,使功能得以及时恢复.本文旨在探讨对高脂饮食喂养的大鼠进行木犀草素干预后,通过超声造影相关参数、血清及肾组织各项指标的检查以及病理学检查等方面,从而反映木犀草素对大鼠肾脏微循环产生影响. 材料与方法: 1.实验材料: (1)实验仪器: ①彩色超声多普勒诊断仪:GE公司生产的有超声造影功能 的Logiq E9,特点为具有低机械指数,选择探头频率为12~14MHz的15L线 阵探头. ②小动物气体麻醉机:由上海玉研科学仪器有限公司生产的ABS型 小动物麻醉机,所使用的麻醉气体为异氟烷(isoflurane). (2)超声微泡:意大利Bracco公司生产的Sono Vue?.该超声微泡为白色 冻干粉末,微观结构由一层磷脂分子将六氟化硫微泡包裹在内组成.六氟化硫是一种在水中不易溶解的惰性无毒气体,在体内主要经呼吸系统排泄.造影剂改善图像质量的方式是提高多普勒信噪比,从而提高超声医师诊断的准确性.微泡平均粒径为2. 5μm左右,90%微泡粒径<6μm,加入生理盐水振荡,配置成悬浊液后,可稳定6小时左右.本实验超声造影过程中一次注射造影剂0. 2ml. (3)实验动物:8周龄SPF级SD雄性大鼠30只,由温州医科大学大学动物实验中心提供,每只大鼠体重约280-320g. 2.实验方法: 本实验将大鼠随机分成正常对照组(N组)、高脂饮食组(H组)、木犀草素组(L组)3组,每组均为10只.对照组大鼠的基础饲料由温州医科大学附属第一医院动物实验中心提供,其他两组给予由80%基础饲料、18%猪油和2 01-胆固醇制备而成的高脂饲料,购入于江苏美迪森生物医药有限公司.喂养至第9周末,在木犀草素组的饮用水中加入木犀草素,由上海生物有限公司提供.三组大鼠按以上喂养方法饲养直至第19周末.每周记录大鼠体重变化情况.建模成功大鼠进行检查首先常规二维超声测量大鼠右肾冠状面最大长径、厚径和叶间动脉阻力指数,后用超声造影的方法,分析三组大鼠肾脏超声造影相关参数.造影结束后即刻将大鼠开胸、开腹,取腹主动脉血10ml,低温离心后,行血清学、肾功能及氧化应激指标的检查.完整剥离大鼠肾脏,一部分固定于10%中性福尔马林溶液中,行常规石蜡包埋、切片,HE、PAS、Masson染色,观察组织病理情况;将另一部分置于液氮中,用于检测肾组织内各项氧化应激及炎症因子的指标、肾小球微血管密度( Microvascular density MVD). 结果: 1.肾脏二维超声检查:三组大鼠右肾长径(L)、右肾厚径(T)及叶间动脉阻力 指数( RI)无统计学差异(P>0.05). 2.超声造影声学定量软件分析肾脏血流动力学情况:与N组及L组相比,H组大鼠肾皮质达峰时间(TTOP)延长、增强强度(A)及充盈速度(C)下降(P<0.05).N组与L组相比,上述各指标差异均无统计学意义(P>0.05).三组TIC曲线下面积(a)无统计学差异(P>0.05). 3.血脂检查结果:与N组和L组相比,H组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)均明显升高(P<0.05).L组与H组相比,以上指标明显改善. 4.肾功能检查结果:H组大鼠胱抑素C(Cys-C)明显较N组及L组升高(P<0. 05),三组大鼠血肌酐值(Scr)、尿素氮值(BUN)比较无统计学意义(P>0.05). 5.血清及肾组织氧化应激指标检查结果:H组血清、肾组织丙二醛(MDA)含量明显较N组及L组高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和瘦素均低于其他两组(P<0.05).H组肾组织内皮型一氧化氮合酶( eNOS)和氧化型低密度脂蛋白( ox-LDL)均高于N组、L组(P<0.05). 6.病理学检查结果:HE染色结果示:H组大鼠肾小球体积较其他两组增大,构成肾小球的细胞数增多,肾小囊扩张,近曲小管上皮细胞内部出现脂滴,炎症细胞浸润.L组病理染色结果较H组明显改善.PAS染色结果示:H组肾小球基底膜厚度较其他两组增加,且系膜基质增多,肾小囊内出现较多脂滴,毛细血管袢增厚呈帽状.Masson染色结果示:H组肾组织内胶原纤维较其他两组增多,基底膜增厚,系膜基质增加. 7.WB检测结果表明H组大鼠单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、转化生长因子(TGF-β1)的表达量最高,均强于N组、L组. 8.免疫组化法计算肾小球MVD结果:免疫组化结果示H组肾小球体积较其他两组增大,且肾小球系膜增生、基底膜增厚较对照组及木犀草素组明显.对肾小球内微血管进行计数分析得到的结果示H组大鼠用CD31和FⅧ标记的肾小球MVD值最大,均大于N组、L组(P<0.05). 结论: 木犀草素不仅能降低摄入过量高脂饮食后蓄积在体内的过氧化物含量,也能减轻体内炎症反应,使高脂饮食大鼠肾脏血流动力学状态得到改善.在高脂血症对肾脏损害的早期阶段,声学造影就能敏感的反应肾皮质微循环变化.