论文部分内容阅读
目的:本研究旨在了解河北省沧州市地区2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)人群的脂联素(adiponectin APN)基因外显子2第45位点(rs2241766)和内含子2第276位点(rs1501299)单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)的分布情况,并探讨这两个位点的单核苷酸多态性与T2DM及胰岛素抵抗的关系,进一步在T2DM的发病机制方面提供一定理论依据,以期在T2DM的治疗方面提供有价值的基因学指导。方法:1研究对象的选择:所有受试者均来源于河北省沧州市地区(本土著居民或祖籍三代均为沧州市人),均为汉族,均为中老年人群,男女比例相当。采用世界卫生组织(WHO,1999年)糖尿病诊断标准,从2015年10月至2016年10月在河北省沧州市中心医院内分泌科住院的中老年患者中随机筛选出100例符合条件的T2DM患者,作为实验组。同时从我院体检中心选取年龄性别匹配的65例无糖尿病的健康受试者,作为对照组。2提取DNA:用康为的血液基因组非柱式提取试剂盒提取外周血DNA。3 SNP分型检测:应用聚合酶链反应~限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)检测脂联素基因SNP+45、SNP+276。利用Premier5及Oligo7软件设计引物,将待测的靶DNA片段进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增复制,2%琼脂糖凝胶电泳图谱鉴定目的条带,切胶回收纯化目的条带,然后利用DNA限制性内切酶Sma I、Eco RI分别在不同体系中进行限制性酶切反应,最后经2.5%凝胶电泳分析酶切后的DNA产物,并判断基因型。另外随机选取部分样品的PCR纯化产物送到公司(北京三博远志)进行测序,以确定SNP+45位点和SNP+276位点的基因型,同时对酶切结果进行验证,以保证实验结果的可靠性。4血浆APN水平的测定:用酶联免疫吸附(ELISA)法测定。结果:1对照组与实验组的临床及生化指标比较两组间性别、年龄、身高相比,无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,实验组体重、体重指数(body mass index BMI)、腰围、臀围、腰臀比(waist to hip ratio WHR)、收缩压(systolic blood pressure SBP)、舒张压(diastolic blood pressure DBP)、空腹血糖(fasting blood sugar FBG)、甘油三酯(triglycerides TG)、胆固醇(total cholesterol TC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol LDL-C)、胰岛素及胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment of insulin resistance HOMA-IR)各值均明显增高,P值均<0.05,差异有统计学意义;实验组高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol HDL-C)和APN各值均下降,P值均<0.05,差异有统计学意义。2血浆脂联素水平2.1实验组的血浆APN水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.2所有样本的APN与临床及生化指标进行偏相关分析。以血浆脂联素水平为因变量,排除其它影响分析的混杂因素后,以各项生化指标为自变量,分别对其单独进行两两偏相关分析。发现血浆APN与腰围、SBP、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR成负相关。其中与腰围、LDL-C的关联性最强,具有显著的统计学意义(P值<0.05)。3实验组和对照组间基因型和等位基因频率分布的比较3.1 SNP+276位点:实验组各基因型的频率分别为TT13%、GT37%、GG50%;对照组分别为TT10.77%、GT20%、GG69.23%,实验组GG基因型频率明显低于对照组,TT基因型频率明显高于对照组,两组间相比差异有显著性(P<0.05)。实验组T和G等位基因频率分别是31.5%和68.5%,对照组T、G等位基因频率分别为20.77%和79.23%,两组间相比差异显著(P<0.05)。3.2 SNP+45位点:实验组各基因型的频率分别为TT53%、TG 36%、GG11%;对照组分别为TT35.38%、TG46.15%、GG18.47%,两组间比较有统计学差异(P<0.05)。实验组T、G等位基因频率分别为71%和29%,对照组T、G等位基因频率分别为58.46%和41.54%,两组间比较有统计学意义(P<0.05)。4脂联素基因SNP+276、SNP+45间胰岛素抵抗相关因素及血浆APN水平比较:4.1SNP+276位点:脂联素基因SNP+276各基因型间指标(BMI、FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR、胰岛素)及APN差异有统计学意义,其P值<0.05。其中以TC、FBG、胰岛素、HOMA-IR这些指标间的差异最具显著性(P<0.05)。采用LSD-t检验进行各基因型间指标的两两比较,可知GG型的TC高于TT型,GG型的HOMA-IR高于非GG型,TT型的胰岛素、FBG高于GG型(P<0.05)。4.2 SNP+45位点:脂联素基因SNP+45各基因型间指标(BMI、FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C、APN、HOME-IR及胰岛素)差异具有统计学意义,其P值<0.05。其中以APN、FBG、胰岛素差异性最显著(P<0.05)。采用LSD-t检验进行各基因型间指标的两两比较,发现TT型的FBG、胰岛素高于非TT型,GG型的APN高于非GG型(P<0.05)。5多因素Logistic回归分型以所有样本各项生化及临床指标为自变量,2型糖尿病为因变量,进行多因素的Logistic回归分析,得出:TC是2型糖尿病的危险因素(P<0.05,OR>1),而HDL-C是2型糖尿病的保护因素(P<0.05,OR<1),SNP+276基因型TT为2型糖尿病的独立危险因素(P<0.05,OR>1)。结论:1河北汉族人群之间存在脂联素+276与+45位点基因型和等位基因频率多态性。2 2型糖尿病组较健康对照组患者的血浆脂联素水平明显降低。血浆APN与腰围、SBP、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR均为负相关关系。其中与腰围、LDL-C的关联性最强,具有显著的统计学意义(P<0.05)。3 SNP+45GG基因型的APN水平高于非GG基因型;SNP+276各基因型间APN水平无差异。4 SNP+276TT基因型、TC增加了2型糖尿病的风险;SNP+45各基因型与2型糖尿病风险无关。