森林草莓ZF-HD基因家族的鉴定与功能初步分析

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森林草莓(Fragaria vesca),是继葡萄、苹果后第三类完成基因组测序的果树。其基因组(2 n=14,240 MB)较小,生长周期短,植株体型较小,栽培管理相对容易,因而替代八倍体栽培草莓成为草莓研究常用的模式植物。Zinc finger Homeodomain(ZF-HD)转录因子是植物中所特有的一类转录因子,由zinc finger(ZF)结构域以及homeodomain(HD)结构域组成。其中ZF代表半胱氨酸和/或组氨酸结合锌原子形成的具有特定功能的局部多肽结构,HD是由长度为60的氨基酸组成的DNA结合域。ZF-HD转录因子在植物的生长发育过程中扮演着重要的角色,例如响应逆境胁迫,调控花的发育,调控种子寿命等。目前关于ZF-HD转录因子的研究多集中在拟南芥,水稻,番茄等植物中,但是在草莓中并未见过相关报道。因此挖掘草莓中该基因家族的基因,了解该基因的表达模式及其功能等对于草莓的生产以及育种来说具有重要意义。本文中以森林草莓Yellow Wonder 5AF(YW)为材料,从森林草莓中分离与鉴定了该基因家族的基因,分析其表达模式,并进行功能验证。主要研究结果如下:(1)从森林草莓中分离鉴定出了10个ZF-HD家族的基因,发现在这个基因家族中大部分基因不含有内含子,有2个基因可以归为MIF亚族。使用在线软件预测了该家族蛋白质的理化性质,其PI从6.88到8.91不等,蛋白质的稳定性较差,分子量在15687.62道尔顿到42101.72道尔顿之间。(2)利用qPCR技术分析了ZF-HD基因家族在森林草莓不同组织部位的表达量,结果表明该基因家族的表达模式存在差异。其中FvZF-HD7基因整体表达量较高,FvZF-HD10基因整体表达量较低。而MIF亚家族的FvZF-HD3和FvZF-HD5基因的表达在大部分组织中未被检测到,推测它们可能在特定的组织或时间表达。(3)从森林草莓组织中克隆出来了8个该基因家族的基因,构建了不同的带有目的基因的表达载体。将融合有GFP的载体注射烟草瞬时表达,其结果表明FvZF-HD1、FvZF-HD2、FvZF-HD4、FvZF-HD6、FvZF-HD7、FvZF-HD8、FvZF-HD10七个蛋白均定位于细胞核中,而FvZF-HD9蛋白未检测到荧光信号。(4)将表达载体通过稳定遗传转化的方法转化进入拟南芥和草莓组织中。发现在过表达FvZF-HD10基因的拟南芥株系中,其主根与野生型相比变长。过表达FvZF-HD6、FvZF-HD10基因的株系其种子在萌发期间的抗旱性与野生型相比显著提高。因此推测这些基因与植物的生长发育和逆境胁迫相关。利用叶盘法进行森林草莓稳定遗传转化的相关探索,目前能够顺利诱导出愈伤组织并出芽生根,有望在不久的将来得到转基因苗从而进一步鉴定这些基因在草莓中的功能。
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