论文部分内容阅读
第一部分环状RNA在冠心病患者血浆中的差异表达目的:环状RNA(circular RNA,circRNAs)是一类闭合环状RNA,属于非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)中的一种。circRNA不具有5’端帽子结构和3’端poly(A)尾,不易被核糖核酸外切酶所降解,因此相对线性RNA结构更加稳定,circRNA广泛存在于真核生物中,发挥着重要的调控作用。医学研究表明,circRNA在人体不同器官组织中的表达量不同,具有组织特异性的特点。在人体血液、唾液、尿液等体液中均可以检测到circRNA,其表达量与多种疾病存在相关联的变化。利用circRNA的上述特点可以将其作为疾病的诊断标志物,已有相关文献报道了circRNA作为肿瘤等疾病的潜在生物标志物。然而,将circRNA作为心血管类疾病的诊断标志物的文献报道还相对较少。在团队前期研究中,运用生物信息学技术筛选出了一批在人主动脉平滑肌细胞中具有差异表达的circRNA。在本项研究中,选取了几种表达量差异较大的circRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,研究其在冠状动脉粥样硬化患者外周血中的表达水平,并进一步探究其在冠状动脉粥样硬化患者和健康者血液中的表达量是否具有差异性,寻找冠状动脉粥样硬化疾病的潜在生物诊断标志物,为冠状动脉粥样硬化的临床诊断和评估提供新的方向和思路。方法:从医院心血管内科共收集了23例确诊为冠状动脉粥样硬化患者的血液样本和24例同期体检中心健康体检者的血液样本。实验采用实时荧光定量PCR技术检测目的基因hsa_circ_0007888、hsa_circ_0000219、hsa_circ_0000721在冠状动脉粥样硬化患者血液中的表达水平,并通过2-△△Ct值法计算hsa_circ_0007888、hsa_circ_0000219、hsa_circ_0000721在冠状动脉粥样硬化患者和健康者血液中表达差异倍数。实验数据采用两独立样本t检验进行统计学分析。结果:1.hsa_circ_0007888、hsa_circ_0000219、hsa_circ_0000721表达于冠状动脉粥样硬化患者外周血中。2.冠状动脉粥样硬化患者外周血中hsa_circ_0007888、hsa_circ_0000219、hsa_circ_0000721的表达量显著高于健康者外周血中的表达量,表达上调倍数分别为7.605、7.532、3.555倍,且表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:hsa_circ_0007888、hsa_circ_0000219、hsa_circ_0000721在冠状动脉粥样硬化患者血液中表达量显著升高,可以作为潜在冠状动脉粥样硬化疾病的临床诊断标志物。第二部分MicroRNA在中度认知障碍患者血浆中的表达初探目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性小分子非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs),普遍存在于人的各种体液中。miRNA在生物体内虽然不直接参与编码蛋白质,但可以通过抑制靶基因或降解靶基因来调控相关基因的表达,具有非常重要的生物学意义。近年来的研究表明,miRNA与人类多种疾病,如癌症、糖尿病、神经系统疾病等疾病的发生发展有密切联系。阿尔兹海默症(Alzheimer disease,AD)是一种神经退行性疾病,目前没有较为有效的治愈方法。已有相关文献表明,miRNA可能参与了AD疾病的发生发展进程。在AD患者的大脑海马区、脑脊液、血液中均发现了大量表达异常的miRNA。因此,miRNA可以作为潜在AD诊断标志物进行研究,已有部分文献进行了相关报道。然而,miRNA在具有糖尿病背景的MCI患者血浆中是否有表达异常?miRNA是否可以作为其AD早期诊断的标记物并没有相关文献进行报道。因此,在本项研究中,我们目的在于在有糖尿病背景的MCI患者血浆中寻找异常表达的miRNA,并寻找AD早期潜在的诊断标记物。本实验通过实时荧光定量(qRT-PCR)技术在有糖尿病病史的MCI患者血浆中检测了7种miRNA的表达水平,并进一步探究了这7种miRNA在具有糖尿病病史的MCI患者血浆中和对照组血浆之间是否具有表达差异,寻找AD潜在的生物诊断标志物,为AD疾病的早期诊断和评估提供新的思路和方向。方法:本研究共检测了7种miRNA:hsa-miR-9、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-106、hsa-miR-137、hsa-miR-146a、hsa-miR-181c。从医院神经内科共收集了5例具有糖尿病背景的MCI患者(病例组)血液样本和8例糖尿病患者(对照组)的血液样本。采用实时荧光定量技术检测了上述7种miRNA在病例组患者中的表达水平,并采用相对定量法2-△△Ct值法计算hsa-miR-9、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-106、hsa-miR-137、hsa-miR-146a、hsa-miR-181c这7种miRNA在病例组和对照组血液样本中的表达量差异倍数。实验数据采用两独立样本t检验进行统计学分析。结果:1.7种miRNA:hsa-miR-9、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-106、hsa-miR-137、hsa-miR-146a、hsa-miR-181c表达于具有糖尿病背景下的MCI患者血浆中。2.7种miRNA:hsa-miR-9、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-106、hsa-miR-137、hsa-miR-146a、hsa-miR-181c在病例组患者血液样本和对照组患者血液样本中的表达差异均不具有统计学意义(P>0.05)。结论:hsa-miR-9、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-106、hsa-miR-137、hsa-miR-146a、hsa-miR-181c在有糖尿病背景的MCI和糖尿病血浆中的表达量并无显著差异。