γδT细胞抗原识别机制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性和SARS相关冠状病毒B细胞抗原表位的筛选

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hiketty
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本论文分两部分:第一部分为γδT细胞抗原识别机制的研究。γδT细胞认为是天然免疫和获得性免疫之间的桥梁,广泛地参与到抗感染免疫、肿瘤免疫和自身免疫等各个方面。但迄今为止,只有少数的γδT细胞受体(T cell receptor,TCR)所识别的配体被鉴定,γδTCR抗原识别的具体细节尚不清楚。对三种抗原受体的结构和序列多样性的研究结果提示,αβTCR、γδTCR和抗体的识别抗原特异性主要决定于其互补决定区(complementarity determining regions,CDRs);γδTCR在抗原识别上与αβTCR相差甚多而与抗体更类似,被认为是以“抗体类似”的方式与抗原结合。γδTCR和抗体整体结构比较以及δ链和抗体重链的CDR3长度和氨基酸多样性的比较提示,γδTCR的δ链和抗体重链在识别抗原中的作用类似;CDR3δ是γδTCR与抗原结合的重要部位。 本课题组的前期工作证明,来源于卵巢癌的γδ肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)δ链CDR3短肽OT3能特异性地结合肿瘤组织、肿瘤细胞系及其蛋白提取物和应激分子。 为了进一步阐明γδTCR抗原识别的机制,本研究利用PCR搭桥技术,将抗体重链CDR3区用被OT3短肽的相应基因序列来替换,构建成嵌合抗体重链的重组基因片段,克隆到表达载体pNγ1中,转染到真核细胞中进行表达;筛选并大量培养阳性表达细胞以获得含γδTCR CDR3δ的嵌合抗体。利用流式细胞、激光共聚焦显微镜和表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)等技术对嵌合抗体的抗原结合特异性进行了研究,比较嵌合抗体与合成的OT3短肽在抗原识别特异性方面的差别,以阐明γδTCR抗原识别的机制及其结构基础。结果表明,含γδTCR CDR3δ的嵌合抗体可以与人卵巢癌细胞系SKOV3、HO8910和Hela等细胞及其蛋白提取物结合,与其他人类肿瘤细胞系及其蛋白提取物不结合或结合较弱,提示嵌合抗体的抗原结合性
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