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目的:前期研究表明在乳腺癌、胃癌细胞中的DNA损伤修复与IKK/NF-κB通路相关。急性髓系白血病(AML)及其白血病干细胞NF-κB活性增高,与其发病和预后密切相关,且AML常用DNA损伤化疗药物治疗。因此本课题旨在探讨IKK/NF-κB信号途径是否调节AML细胞的DNA损伤修复及其相关分子机制;抑制该通路是否能增强DNA损伤药物对AML细胞的清除作用。方法:(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DNR作用于AML细胞后,加入或不加入IKKβ特异性抑制剂BMS-345541对该细胞增殖抑制作用的影响;(2)流式细胞术检测BMS-345541对受到DNR损伤的AML细胞DNA损伤修复的影响。HL-60和KG1a细胞,分组进行药物处理,实验分为对照组(CTL)、损伤组(damage)(DNR处理2 h);修复组(repair)(DNR处理2 h后洗掉药物继续培养12 h)、联合用药组(DNR&BMS);(3)流式细胞仪检测BMS-345541对AML细胞的凋亡诱导作用,细胞分组处理如前;(4)流式细胞仪检测BMS-345541对AML细胞周期的影响;(5)高内涵分析法和Western Blot观察上述处理组γ-H2AX、p-ATM、RAD51在断裂位点的聚集情况;(6)彗星实验检测BMS345541对KG1a细胞DNA损伤修复的影响;(7)通过磁珠分选出人白血病病人的CD34+细胞,流式细胞术、高内涵分析法、彗星实验检测BMS345541对人的CD34+细胞DNA损伤修复的影响;(8)通过用特异的以Rel A m RNA为靶点的小发夹RNA(sh RNA)的慢病毒载体,感染KG1a细胞,构建并鉴定稳定的Rel A下调的细胞株KG1a Rel A(-);(9)MTT法检测药物对KG1a Rel A(-)及KG1a Vector细胞的增殖抑制作用;(10)用流式细胞术和高内涵法检测KG1a Rel A(-)及KG1a Vector在DNR作用下DNA损伤修复的影响;(11)用HR和NHEJ通路特异性的报告基因,观察Rel A对DNA损伤修复通路的影响;(12)基因芯片检测IKK/NF-影响信号途径调控DNA损伤修复中m RNA和长链非编码RNA的差异表达(13)BMS联合DNR对HL-60细胞荷瘤小鼠的成瘤的影响。结果:1.MTT法、流式细胞术、高内涵分析、彗星实验和Western Blot均表明BMS-345541抑制KG1a细胞和HL-60细胞的DNA损伤修复;增加了DNR诱导的AML细胞凋亡率;逆转DNR导致的KG1a细胞和HL-60细胞的G2/M期阻滞。其作用机制与RAD51在DNA断裂处聚集减少,从而影响HR修复有关;与此一致,由于DNA损伤未能修复,DNA损伤应答信号p-ATM持续被激活。2.流式细胞术、高内涵分析和彗星实验这三种方法检测CD34+祖/干细胞DNA损伤情况,联合用药组DNA损伤比修复组明显,提示BMS-345541可以有效抑制AML祖/干细胞DNA损伤的修复。3.构建了稳定的Rel A(P65)下调的细胞株KG1a Rel A(-)细胞株。MTT法、流式细胞术和高内涵实验均表明Rel A的下调抑制了KG1a细胞的DNA损伤修复;增加了DNR诱导KG1a细胞的凋亡率;逆转DNR作用下KG1a细胞G2/M期阻滞;并且可同时抑制KG1a细胞HR和NHEJ通路活性。4.基因芯片结果分析表明,DNA损伤修复有关的下调较明显的基因有PARP1和XRCC3;与PARP1,XRCC3均为负相关且相关系数较高的Lnc RNA有uc010ixu.3和uc001vvr.1。5.抑制IKK/NF-r.信号途径可增强DNR对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型作用。结论:体内外实验表明了抑制IKK/NF-了瘤信号途径可有效抑制AML细胞的DNA损伤修复,逆转G2/M期阻滞,增强DNA损伤化疗药物DNR对细胞的增殖抑制作用和细胞凋亡诱导作用。可能的分子机制是:下调IKK/NF-是:信号途径活性,促使DNA损伤AML细胞的uc010ixu.3和uc001vvr.1表达升高,进而减少PARP1和XRCC3表达,使得AML细胞的DNA损伤修复能力降低。