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大青(Clerodendrum cyrtophyllun Turcz)为马鞭草科(Verbenaceae)大青属(Clerodendrum)植物,是我国传统中药,也是黎族药。根、叶药用,防治齿痛、痢疾、清热解毒,消炎镇痛,凉血利尿和蜈蚣咬伤之效,中医临床上用于流感、腮腺炎、肝炎和肿瘤、扁桃体炎、腮腺炎、急性喉炎、牙周炎、细菌性痢疾、虫、蛇咬伤、肿毒、感冒发热等,具有抗病毒、抗菌、降压等作用。经文献研究发现,大青叶的药理作用与其中已报道黄酮类化合物的药理作用相似,初步预测其药理作用与总黄酮量及其抗氧化活性有关。本研究采用单因素试验法结合响应曲面实验进行设计,通过对提取试剂乙醇浓度、超声时间、提取温度的考察,建立大青中抗氧化活性成分的超声波辅助提取最佳工艺,以总黄酮含量和总酚含量以及清除DPPH·和ABTS·的能力作为考察指标;在最优条件基础上,对大青叶进行了超声提取并使用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取划段,并用分光光度法测定了总浸膏及各萃取段的总黄酮量、总酚含量。采用了DPPH·法、ABTS·法、还原Fe3+、螯合Fe2+离子法、O2·-自由基法和抑制·OH六种抗氧化模型对大青提取物进行抗氧化活性评价;为进一步阐明大青的药效物质基础,我们对大青叶提取物进行单体化学成分的分离。研究结果如下:1、大青叶抗氧化活性成分提取最佳工艺的研究:使用单因素实验法确定响应曲面法的中心水平为:乙醇浓度40%,超声时间80min,提取温度60℃,进一步采用响应曲面法确定超声辅助提取大青中总酚含量(TPC)的最优条件为:乙醇浓度60.9%、超声时间85.4min、超声温度63.3℃,在此条件下的TPC为16.8±0.2mgGAE/gDW;总黄酮含量(TFC)的最佳条件为:乙醇浓度67.7%、超声时间82.9min、超声温度63.0℃,在此条件下的TFC为49.36±0.4mgRT/gDW;抗氧化物质清除DPPH·能力的最佳条件为:乙醇浓度48.8%、超声时间85.1min、超声温度63.9℃,在此条件下清除能力为86.8±0.2%;抗氧化物质清除ABTS·能力的最佳条件为:乙醇浓度50.6%、超声时间81.3min、超声温度63.4℃,在此条件下清除能力为92.9±0.5%。在提取过程中乙醇的浓度是最显著的影响因素。对总黄酮提取率与其抗氧化活性之间的关系进行了探讨,研究表明,总黄酮类成分的含量与其抗氧化活性成正相关性,具有较好的一致性。2、大青叶总浸膏和各萃取段抗氧化活性评价:正丁醇段总黄酮和总酚含量最大,分别为57.52±0.13mgRT/gDW,5.1±0.019mgGAE/gDW大青清除DPPH·的能力最强的是乙酸乙酯萃取段IC50为0.36±0.006mg.ml-1;清除ABTS·能力最强的是乙酸乙酯萃取段IC50为0.102±0.052mg.ml-1;清除·OH能力最强的是正丁醇萃取段IC50为0.653±0.08mg.ml-1;螯合Fe2+离子能力最强的是二氯甲烷萃取段1C50为0.742±0.014mg.ml-1;清除O2·-能力最强的是乙酸乙酯萃取物IC50为13.063±1.555mg.ml-1;还原Fe3+能力最强的是乙酸乙酯段萃取段EC50为0.203±0.008mg.ml-1。结果显示:各萃取段中黄酮类含量大于酚类含量,并且黄酮含量与酚类具有正相关性(P=0.1097>0.05),其中乙酸乙酯段和正丁醇段具有较好的抗氧化活性较好。3、大青单体化学成分:本研究采用正相硅胶,聚酰胺柱层析,Sephadex LH-20葡聚糖凝胶,等分离方法共分离得到6个单体化合物,运用HPLC、 ESI-MS、 IDNMR及2DNMR等现代波谱技术鉴定了其中的4个,它们分别为:3’-甲氧基蓟黄素、滨蓟素、3’-甲氧基蓟黄素-4’-葡糖苷、22-脱氢赪桐甾醇3p-O-β-D-葡糖苷,其中滨蓟素、和22-脱氢赦桐甾醇3p-O-β-D-葡糖苷为首次从该植物中分离得到;本研究将进一步阐明了大青抗氧化作用的物质基础和作用机制,为开发新的天然抗氧化剂提供了理论依。