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猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)属于细小病毒科细小病毒属,是一种自主复制型病毒,是造成母猪繁殖障碍性疫病的主要病原体之一;母猪感染该病毒后可导致流产、木乃伊胎及死胎等,其给国内外养猪业造成了严重的经济损失。Mary与Mahnel在1966年首次发现了该病毒,而后发展到世界多个国家和地区;在20世纪80年代,我国的多个地方都分离发现猪细小病毒病。经典的猪细小病毒病是由猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1,PPV1)感染引起的,自此预防、控制并最终根除该病成了我国当前面临的一项艰巨任务。因此,如何准确、及时地检测该病原的抗体情况在该病的防控中起着重要作用。本课题开展了针对PPV1 VP2蛋白的多克隆抗体的制备和PPV1间接ELISA检测方法的建立,为后续检测试剂盒的研发做好铺垫。本试验主要以NADL-2经典毒株的VP2基因为参考序列,以猪细小病毒AV30毒株的DNA为模板,设计了编码VP2蛋白第155-439位氨基酸的表达引物,成功克隆出VP2基因,并将其成功连接到表达载体pET-30a(+)上,转化到BL21(DE3)后进行诱导表达。可溶性分析表明原核表达的融合蛋白是以包涵体的形式存在,复性后蛋白进行Western bolt检测表明其具有较好的抗原性;利用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组VP2蛋白,并作为免疫原,经四次免疫新西兰大白兔,制备PPV1 VP2蛋白的多克隆抗体,Western bolt和间接ELISA检测证明抗血清具有较好的特异性,抗体效价为1:25 600;免疫兔血清经硫酸铵沉淀、Protein A树脂亲和层析纯化后,得到较高纯度的多克隆抗体;通过优化反应条件,建立了PPV1间接ELISA检测方法,该方法不与NA-PRRSV、PCV2、PRV和CSFV抗体发生交叉反应,表明该方法具有很好的特异性;通过与国、内外检测PPV1抗体的同类检测试剂盒的比较,结果显示,该间接ELISA方法对参考阳性血清的检出限可以达到1:800倍稀释度,临床敏感性为94.3%(132/140),略高于武汉科前公司的试剂盒的敏感性,低于西班牙INGEZIM PPV间接ELISA试剂盒97.1%(136/140)的敏感性;该方法临床特异性为96%(96/100),高于武汉科前试剂盒94%(94/100),略低于西班牙INGEZIM PPV间接ELISA试剂盒的特异性97%(97/100)。与国内外试剂盒的比较结果表明,本研究建立的PPV1间接ELISA方法具有很好的临床特异性和敏感性,具有较大的开发利用价值。