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奶牛乳腺炎泛指奶牛乳腺组织发生的各种类型炎症[1],即乳腺受到物理、化学刺激,特别是微生物侵袭而造成的炎性变化。此病最常见的病因即被多种特定性病原微生物感染,包括细菌、霉形体、真菌及病毒,其中以金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌这三种病原体为主。为了更有效的防治该病的发生,本实验针对主要致病菌金黄色葡萄球菌的表面蛋白FnBA分别研制了亚单位疫苗及核酸疫苗,并进行免疫学特性研究。根据GenBank中纤连蛋白结合蛋白A基因(FnBA)序列设计了一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,结果获得了1 735bp的DNA片段;将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,成功地构建了克隆质粒pMD18-T-FnBA。以BamHI和HindIII双酶切pMD18-T-FnBA和pET-28a(+),将纯化的基因FnBA亚克隆至pET-28a(+)中,构建出原核表达质粒pET28a-FnBA,并将其转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经1mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE可见,在约85kD处出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带。又经Western-blot分析表明,该表达产物含有His-tag融合多肽,可以与抗His-tag单克隆抗体发生特异反应,为pET-28a(+)载体中T7启动子控制下的外源基因表达产物,该外源基因得以成功表达。以BamHI和HindIII双酶切pMD18-T-FnBA和真核表达载体pVAX1,将纯化的基因FnBA连接到pVAX1中,构建出重组核酸疫苗质粒pVAX1-FnBA,构建的核酸疫苗质粒转染HeLa细胞,间接免疫荧光检测(IFA)结果表明,所构建的核酸疫苗质粒能在真核细胞中正确表达目的蛋白。将以上研制的亚单位疫苗及核酸疫苗分别作为抗原进行小鼠免疫实验。采用间接ELISA的方法测定小鼠血清中特异性抗体水平变化;检测血清中Th1/Th2类细胞因子含量;以及T淋巴细胞增殖实验。结果表明,两种疫苗都能使免疫组小鼠血清中特异性抗体水平升高,且能诱导机体产生特异的细胞免疫和体液免疫应答。