柑橘皮渣是芸香科柑橘属植物及其栽培变种的果实在加工过后剩下的果皮废弃物，目前国内主要通过填埋方式对其处理。柑橘类黄酮是一系列具有显著生物活性的黄酮类化合物，主要来自于芸香科柑橘属植物及其栽培变种的果实或果皮中。柑橘皮是中药陈皮的原材料，而柑橘类黄酮是陈皮中的主要药效成分。因此，研究柑橘皮渣中黄酮类化合物的提取纯化和生物活性，对于柑橘皮渣的科学利用与环境保护都具有重要的意义。本课题以柑橘皮渣为原料，根据本课题组前期研究成果，用不同浓度的乙醇通过回流提取法制备了柑橘皮提取物，并采用分光光度法对柑橘皮提取物中的柑橘总黄酮进行了含量测定。然后通过神经介素U2受体激动剂的报告基因筛选模型对不同柑橘皮渣提取物和9种柑橘类黄酮化合物单体及其衍生物进行了神经介素U2受体激动剂活性测定，并对其中的活性物质进行了效能、半效浓度和效价分析。最后通过通过siRNA干扰分析实验对柑橘类黄酮中的各活性物质进行了真阳性验证。1、柑橘皮总黄酮的提取、纯化与检测用回流提取法从柑橘皮渣提取柑橘皮总黄酮。首先用石油醚对柑橘皮渣脱脂脱色，然后分别用水、60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇，料液比l:20，提取温度80℃条件下回流提取3次，每次提取4h。过滤，减压蒸馏，低温冷冻干燥，得到柑橘皮总黄酮。采用分光光度法，以芦丁作为标准品，在510nm处检测提取物种柑橘总黄酮的含量。测得柑橘皮渣水提物、60%乙醇水提物、75%乙醇水提物和95%乙醇水提物样品中柑橘总黄酮的含量分别为61.143%、62.684%、72.116%和71.556%。然后通过精密度实验和加样回收率实验对检测方法进行了评估，确定此方法可以用作柑橘皮提取物中柑橘总黄酮的检测。2、阴性细胞株的构建利用哺乳动物表达载体质粒（NMU2R/pCDNA3.1+）和报告基因质粒(3×MRE/3×CRE/SRE-Luciferase/pGL3)按1:5比例共转染HEK293细胞。经过含800μg/mL G418培养基筛选后，挑取单克隆细胞。然后用CRE(cAMP response element)激活剂Forskolin作用细胞,筛选得到一株受Forskolin刺激后剂量依赖表达荧光素酶，对NMU2R的内源配体无荧光响应的阴性对照细胞株。95%柑橘皮渣提取物的效能最高。3、神经介素U2受体激动剂活性研究利用能够稳定表达NMU2R、且在受到NMU2R激动剂刺激后剂量依赖地表达荧光素酶的细胞株（NMU2R细胞株）和构建得到的阴性对照细胞株，对柑橘皮提取物和9种柑橘类黄酮及其衍生物进行荧光响应检测。发现所有柑橘皮提取物及柑橘类黄酮中的橙皮苷和川陈皮素在NMU2R细胞株中能激活报告基因大量表达，而在阴性对照细胞株中不激活报告基因表达，因此柑橘皮提取物及柑橘类黄酮中的橙皮苷和川陈皮素可能对NMU2R有激活效应；然后对激活效果最好的柑橘皮提取物、橙皮苷和川陈皮素进行效能、半效浓度及效价强度检测，发现川陈皮素的半效浓度最低。4、siRNA干扰分析设计并构建两条针对NMU2R的siRNA，通过western blot实验检测两条siRNA的干扰效率，得到干扰效率较高的干扰序列——NMU2R-1.用针对NMU2R-1序列的siRNA干扰NMU2R细胞后，再次对95%乙醇柑橘皮提取物、橙皮苷和川陈皮素进行荧光响应检测。发现，柑橘皮提取物、橙皮苷和川陈皮素对NMU2R细胞中荧光素酶基因的激活作用是通过NMU2R介导的。