目的:采用代谢组学技术筛选失眠症肝郁脾虚证的血清代谢标志物,为失眠症肝郁脾虚证的证型判别提供代谢组学依据。方法:1.设立肝郁脾虚证组(I组)、肝郁化火证组(J组)、心脾两虚证组(K组)、健康组(A组)。根据失眠症及中医相关证型诊断标准筛选患者,每组10例,对照患者基线情况筛选10例健康受试者。2.对40例受试者的基本信息,如性别、年龄、病程、PSQI得分、三组疾病组的中医主症及兼症进行记录。3.对40例患者的血清样本进行采集,所有血清样本采用代谢组学全谱检测。对样本数据进行预处理,统计方法采用单变量分析和多变量分析法,根据组间比较的P值、VIP值、差异倍数对潜在代谢标志物进行筛选。4.在初步筛选出的潜在代谢标志物中进行进一步筛选肝郁脾虚证的代谢标志物,通过组间I:A、I:J、I:K比较,筛选出在三个比较组中都具有差异的离子,确定为失眠症肝郁脾虚证的代谢标志物。5.最终筛选出的差异性物质通过检索“人源代谢物数据库”(The Human Metabolome Database,HMDB)确定其生物信息。在“京都基因与基因组百科全书数据库”(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)中确定代谢标志物的代谢通路。结果:1.受试者的性别构成比较,肝郁脾虚证组、肝郁化火证组、健康组均为男性3例,女性7例。心脾两虚证组男性1例,女性9例。卡方检验X2=1.773,P=0.703,组间比较无意义(P>0.05);年龄分布比较,肝郁脾虚证组36.60±12.12岁、肝郁化火证组38.10±11.97岁、心脾两虚证组41.30±16.80岁,健康组37.70±11.28岁,单因素方差分析F=0.236,P=0.871,组间比较无意义(P>0.05);失眠症患者的病程比较,病程最短者6个月,最长者超过5年,卡方检验X2=0.931,P=1.000,组间比较无意义(P>0.05);失眠症患者的PSQI总分比较,肝郁脾虚证组11.50±2.17,肝郁化火证组11.50±2.37,心脾两虚证组10.80±2.34,3组患者PSQI总分都超过10分,提示都存在睡眠障碍(PSQI总分大于7分即提示睡眠障碍),单因素方差分析F=0.309,P=0.737,组间比较无意义(P>0.05);PSQI各因子计分比较方面,肝郁脾虚证组、肝郁化火证组、心脾两虚证组患者的PSQI的睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍各因子计分的组间比较无意义(P>0.05)。日间功能损害方面,肝郁脾虚证组、肝郁化火证组计分高于心脾两虚证组,组间比较无意义(P<0.05)。2.本研究选纳的30例失眠症疾病组患者的睡眠主症均具有不易入睡、易醒、醒后不易入睡。兼症47项,疾病组肝郁脾虚证患者表现出:健忘10次、心烦8次、神疲8次、疲倦8次、乏力8次、面色无华7次、头晕6次、脘痞6次、易怒5次、口干5次,即为高频出现的前10个症状;肝郁化火证患者表现出:健忘9次、易怒8次、疲倦7次、易惊6次、口干6次、头晕6次、面色无华6次、喜太息5次、心烦5次、心悸5次,即为高频出现的前11个症状;心脾两虚证患者表现出:神疲9次、健忘8次、疲倦7次、便溏6次、面色无华6次、脘痞6次、精神抑郁4次、乏力4次、纳呆4次、喜太息3次,即为高频出现的前10个症状为。3.肝郁脾虚组与健康组比较,共筛选出418种潜在代谢标志物,包含阳离子185种,阴离子233种;肝郁化火证组与健康组的组间比较,共筛选出4770种潜在代谢标志物,包含阳离子3739种,阴离子1031种;心脾两虚组与健康组的组间比较,共筛选出1529种潜在代谢标志物,包含阳离子943种,阴离子586种。4.在上述已经筛选出的潜在代谢标志物的基础上(共6717种潜在代谢标志物,包含阳离子4867种,阴离子1850种),进一步筛选肝郁脾虚证的代谢标志物。二次筛选三个比较组(I:A、I:J、I:K)都具有差异的离子,发现13种代谢标志物。这13种代谢标志物的VIP值都大于1,提示肝郁脾虚证组与其余各组的组间分区度较好;其组间比较的P值都小于0.05,提示组间差异具有统计学意义;组间比较的差异倍数都大于1.2,提示肝郁脾虚证组的离子相对浓度呈上调趋势。5.与失眠症肝郁脾虚证密切相关的13种物质,通过查询“人源代谢物数据库”(The Human Metabolome Database,HMDB),物质分类信息包括5类,其中6种物质属于苯丙酸和聚酮,3种物质属于脂类和类脂分子,2种物质属于茴香醚,2种物质分别为木脂素和苯骈吡喃。6种苯丙酸和聚酮类物质是:(S,E)-Zearalenone:玉米赤霉烯酮Myrigalon B:2’-羟基-二氢查耳酮的有机化合物Myrigalone E:2’-羟基-二氢查耳酮的有机化合物2-[1-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)propyl]-3,5-dimethoxyphenol:2-[1-羟基-3-(4-甲氧基苯基)丙基]-3,5-二甲氧基苯酚1-(2,4-dihydroxy-6-methoxy-3,5-dimethylphenyl)-3-phenylpropan-1-one:1-(2,4-二羟基-6-甲氧基-3,5-二甲基苯基)-3-苯基丙烷-1-酮4-(1-hydroxy-3-phenylprop-2-en-1-yl)-5-methoxy-2,6-dimethylbenzene-1,3-diol:4-(1-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-基)-5-甲氧基-2,6-二甲基苯-1,3-二醇3种脂质和类脂质物质:Myrigalone A:肉豆蔻酮A Hexyl glucoside:己基葡萄糖苷1,3-Diacetoxy-4,6,12-tetradecatriene-8,10-diyne:1,3-二乙氧基-4,6,12-十四碳三烯-8,10-二炔2种茴香醚物质:Verimol C:茴香醚Isoeugenol benzyl ether:异丁香酚苄基醚木脂素类物质:4-Hydroxyenterodiol:4-羟基肠二醇苯骈吡喃类物质:2-hydroxy-2-[8-hydroxy-2-methyl-2-(4-methylpent-3-en-1-yl)-2H-chromen-5-yl]acetic acid:2-羟基-2-[8-羟基-2-甲基-2-(4-甲基戊烯-3-烯-1-基)-2h-色烯-5-基]乙酸结论:基于血清代谢组学分析,失眠症肝郁脾虚证可能存在“肠肝循环代谢”紊乱,苯丙酸和聚酮、脂类和类脂、茴香醚可能是区分失眠症肝郁脾虚证与肝郁化火证、心脾两虚证的典型代谢标志物,检测失眠症患者血清中的上述物质,可为失眠症肝郁脾虚证的证型判别提供代谢组学依据。