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目的:实验采用shRNA法对下调UBC9基因后人肝癌细胞株MHCC97h迁移能力和侵袭能力变化进行观察,并探究其可能的相关机制。方法:1、采用事先设计并委托公司合成的针对UBC9基因的质粒,而后对人肝癌细胞进行瞬时转染。实验分组为:正常肝癌细胞组(Normal组)、脂质体组(Lipo-2000组)、空载质粒(NC-shRNA)组及目的质粒(UBC9-shRNA)组。2、采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real Time-PCR,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)方法同时检测各实验组肝癌细胞于转染前及转染后UBC9mRNA及UBC9蛋白质的表达量改变。3、采用划痕实验、Transwell体外实验分别对各实验组肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力进行检测。4、采用蛋白印迹(Western Blot)法对各实验组肝癌细胞内的β-catenin、MMP-2、MMP-9蛋白表达量改变进行检测。结果:1、UBC9-shRNA于转染肝癌细胞之后的24h检测mRNA表达量及48h检测蛋白质表达量,结果可见目的质粒组UBC9无论在mRNA水平还是在蛋白水平较其余实验对照组均明显下降。2、划痕实验结果显示UBC9基因的表达经过下调后,UBC9-shRNA组肝癌细胞和其余对照组相比,其迁移能力下降。3、Transwell体外实验结果显示UBC9的表达经过下调后,UBC9-shRNA组的肝癌细胞侵袭能力及其迁移数量较其他对照组明显下降。4、Western Blot结果显示,UBC9-shRNA组中的β-catenin、MMP-2、MMP-9蛋白水平较其余实验对照组均明显下降。结论:1、在肝癌细胞中,UBC9-shRNA无论在mRNA水平还是蛋白水平均可以有效的地下调UBC9表达,其侵袭能力及迁移能力同时也下降。2、下调了UBC9的表达后,肝癌细胞可能可以通过Wnt通路中的β-catenin及其下游的靶基因MMP-2及MMP-9调节侵袭及迁移能力。