落叶松木屑中阿拉伯半乳聚糖的提取纯化研究

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本文以落叶松木屑为原料,对落叶松阿拉伯半乳聚糖的提取、分离纯化、部分理化性质与结构及其体外抗氧化性进行了研究,为其进一步开发利用奠定基础。采用水提醇沉法提取阿拉伯半乳聚糖,通过单因素和正交试验,确定了最优提取工艺条件为:原料粒度40-60目,浸提温度70℃,浸提时间2h,料液比1:10,浸提2次;最适醇沉工艺条件为:提取液浓缩比5:1,醇沉时间20h,醇沉乙醇终浓度70%。在此工艺条件下,阿拉伯半乳聚糖得率为8.40%。采用石灰法脱蛋白和活性炭脱色对粗多糖进行纯化。确定石灰法脱蛋白的最佳工艺条件为:添加0.04%的氢氧化钙,70℃下保温40min,蛋白质去除率可达96.80%;活性炭脱色最佳工艺条件为:脱色温度40℃,脱色时间20min,活性炭用量1.0%,脱色率为40.10%。比较研究了10种树脂的脱色和脱蛋白效果,最终选择了聚酰胺树脂。添加5.0%的聚酰胺树脂,静态吸附12h,脱色率为64.87%,蛋白质去除率为85.38%,阿拉伯半乳聚糖损失率为7.97%。通过DEAE-纤维素(OH-)色谱柱对除杂后的多糖进行分级纯化,得到2种多糖组分,即蒸馏水洗脱峰(LAG-1)和0.05mol/LNaCl溶液洗脱峰(LAG-2)。LAG-1与LAG-2分别通过Sephadex G-75疑胶色谱柱分离纯化,得到LAG-1a、LAG-1b和LAG-2a。LAG-1b经过高效凝胶渗透色谱得到单一对称峰,为均一组分,重均分子量为21021Da。理化性质研究结果显示,LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均易溶于冷水、稀碱,其水溶液透明;不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂;不含还原糖、淀粉、游离蛋白质、酚类等杂质。气相色谱测得LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均主要由阿拉伯糖和半乳糖组成。紫外光谱测定结果表明LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a中均不含核酸和蛋白质。红外光谱测定结果表明LAG-1a、LAG-1b、LAG-2a均具有多糖的特征吸收峰,并且其糖环为吡喃环,且其糖环均以β-糖苷键连接。碘-碘化钾实验结果表明,LAG-1a、 LAG-1b、AG-2a都可能存在较长的侧链和较多的分枝。刚果红实验结果表明,LAG-1a和LAG-1b具有有序的三股螺旋结构,LAG-2a不具有三股螺旋结构。体外抗氧化性研究结果表明,随着多糖浓度的增加,LAG-1与LAG-2的还原力及清除羟自由基和DPPH自由基的能力逐渐增强,且在同等浓度下,LAG-2的抗氧化活性强于LAG-1。
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