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为了研究鱼类半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)的功能，探索其在水产品加工和病害防治中的应用潜力以及大量生产的技术途径，本实验利用基因工程技术，实现了中华鲟(Acipenser sinensis)cystatin在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达，得到了具有生物活性的重组中华鲟cystatin。
l 中华鲟cystatin在大肠杆菌中的表达利用PCR技术对中华鲟cystatin cDNA进行改造，并将改造后的编码中华鲟cystatin成熟肽的cDNA定向重组于大肠杆菌表达质粒pBV220，转化大肠杆菌：DH5α，构建重组工程菌。该工程菌经温度诱导、SDS-PAGE检测，在约l2.4 kD处有一特异蛋白带，该特异蛋白的含量约为菌体总蛋白的29％，实现了中华鲟cystatin在大肠杆菌中的高效表达。木瓜蛋白酶活性抑制实验结果表明，该重组cystatin具有明显的酶活抑制作用，lμg重组中华鲟cystatin约能抑制3μg木瓜蛋白酶的水解活性。
2 中华鲟cystatin在毕赤酵母中的分泌表达将PCR改造后的编码成熟肽中华鲟cystatin的基因亚克隆到毕赤酵母整合型表达载体pPICZαA，氯化锂法转化毕赤酵母菌株GS 115，构建表达cystatin的酵母工程菌。经甲醇诱导、SDS-PAGE检测培养基上清液，实现了中华鲟cystatin在毕赤酵母中的表达。为进一步开展重组中华鲟cystatin发酵条件的研究，本实验对三种诱导方法进行了比较，并从诱导时间和培养基的pH值两方面对重组菌表达量的影响作了研究。结果表明，采用单培养基法，诱导72h，培养基pH值为6.5时，可达到较好的表达效果。重组cystatin表达量可达每升培养基215mg，约占培养基上清总蛋白量的76.3％。经离子交换层析法纯化后，重组蛋白的纯度达94.2％。活性检测结果表明，毕赤酵母表达的重组cystatin对木瓜蛋白酶的活性具有明显的抑制作用，lμg重组中华鲟cystatin约能抑制15μg木瓜蛋白酶的水解活性。