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目的:探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)作为干细胞标志物表达的意义及其作用的分子机制,从而明确CD133-2是否为儿童B-ALL的白血病干细胞(LSC)标志,也为进一步研究儿童B-ALL的分子发病机制奠定实验基础。方法:1、流式细胞术检测初诊和复发儿童B-ALL(共38例,包含初诊34例,复发4例)骨髓单个核细胞(BM-MNCs)CD133-2的表达(IgG1-PE为同型对照),并采集5例CD133-2阳性表达(比例≥20%)的B-ALL患儿(初诊4例,复发1例)BM-MNCs,免疫磁珠分选法(MACS)分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞,体外甲基纤维素半固体集落培养(包含SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO等成分),观察各亚群集落形成能力,并对培养后形成的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色做形态学鉴定。2、6例CD133-2表达阳性的B-ALL(初诊4例,复发2例)患儿BM-MNCs中MACS分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞,以CD133-2+CD19-亚群细胞为实验组,CD133-2-CD19+亚群细胞为对照组,采用Real-time PCR法和基因芯片试剂盒,分析与TGF-β信号通路相关的84个基因分子在以上两群细胞中的表达差异。结果:1、流式细胞仪检测结果显示:38例儿童B-ALL中, CD133-2的阳性表达率为60.5%(比例≥20%为表达阳性)。其中5例儿童B-ALL的BM-MNCs经MACS分选纯化后,体外甲基纤维素半固体集落培养14天,CD133-2+CD19-细胞群在第5天出现红系集落,第7天后出现混合集落,第10天时集落较第5天增长10倍,增长速度明显加快,第12天时集落状态良好,第14天后集落未再增加。对生长状态良好的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色,CD133-2+CD19-形成的集落中可见红系、粒系、巨噬和单核系细胞。其他亚群形成集落不明显。比较各亚群细胞集落形成方面差异具有显著的统计学意义(P<0.001)。2、Real-time PCR检测结果显示:初诊儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6基因的上调有关,与SERPINE1基因的下调有关;复发组中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游TGFβ1、LTBP1基因的上调有关,与IGFBP3、 SERPINE1基因的下调有关。结论:1、体外半固体集落培养表明儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群具有多向分化能力,结合我们前期体外悬浮培养结果提示其具有长期增殖能力,说明此亚群具备了LSC的特性,由此CD133-2+CD19-亚群可能是儿童B-ALL来源的LSC免疫表型标志。2、DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6、SERPINE1以及TGFβ1、LTBP1、IGFBP3、SERPINE1等TGFβ信号通路的转录分子分别参与了初诊和复发B-ALL患儿CD133-2+CD19-亚群细胞生物学特性的调控,这些分子的异常表达可能与儿童B-ALL的发病或复发有关。