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西瓜(Citrullus vulgaris Schrad.)是世界重要的经济作物之一,也是世界十大水果之一,在人们日常生活中占有重要的地位。西瓜的抗病和品质育种已日益引起育种工作者的重视。普通二倍体西瓜离体培养植株高效再生是基因转移、四倍体离体诱导的前提条件(Choi等,1994;Compton等,1996)。因此,建立高效的植株再生体系是成功获得转基因或倍性变异植株的关键。西瓜基因型、外植体类型、不同激素组合、苗龄等都会对再生频率产生影响(许智宏等,1979;Blackman等,1982;Compton等,1993a)。本试验首先以“京欣1号”母本和“伊选”西瓜4d苗龄子叶为外植体,研究离体培养植株高效再生体系。结果表明:“伊选”叶远轴端外植体的植株再生频率仅为1%,而子叶近轴端外植体在5mg/L BA+0.1 mg/LIAA的激素组合下植株再生频率高达100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有组合中最多,为10.3个;“京欣1号”母本子叶近轴端外植体在2mg/L BA+0.5mg/L IAA激素组合下植株再生频率为100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有激素组合中最多,达6.9个。本试验条件下,子叶近轴端外植体接种4d即分化出不定芽,至再生苗的移栽仅需40d,不定芽在MS+0.1 mg/L NAA的生根培养基上的生根率为97.3%,移栽成活率达98.5%。 在建立了用于品质优良的西瓜品种“京欣1号”母本和“伊选”遗传转化和多倍体育种的高效再士体系后,本试验以“京欣1号”母本为材料,利用诱变剂秋水仙碱、除草剂欧拉灵等处理西瓜子叶,分别进行不同浓度、不同处理时间、处理方式及预培养试验对四倍体离体诱导的影响。秋水仙碱诱导四倍体的结果表明:液体处理方式诱导四倍体的效率优于固体处理方式。当用200mg/L秋水仙碱处理子叶12h时,最高的植株再生率、存活率和四倍体率分别为100%、84.3%和57.1%。而同浓度同时间处理的固体处理方式中,最高的植株再生率、存活率和四倍体率分别为73.3%、78.6%和55.6%。在秋水仙碱处理子叶之前,先将它们放在不含秋水仙碱的培养基上培养一段时间,以提高外植体抗毒害的能力,结果表明预培养5d效果最好,存活率和四倍体率分别达95.2%和66.7%。用除草剂欧拉灵诱导四倍体的结果表明:0.4 mg/l浓度的液体处理方法获得了85.6%的四倍体诱导率,高于同浓度的固体处理方式,其四倍体诱导率为67.2%,但是固体处理方法的存活率高于液体处理方法的存活率(分别为68.2%和53.7%)。两种处理方式在子叶再生率和平均每个外植体再生芽数方面没有明显差异。 本试验进行了两种鉴定二倍体和四倍体的方法:一是利用根尖染色体数鉴定法鉴定了所有处理组合获得的植株,并进一步用保卫细胞叶绿体计数法确认了染色体鉴定法的准确性。二是利用cONA.RAPO反应确定四倍体和‘倍体的ONA差异。