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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种单股正链RNA病毒,属于尼多病毒目(Nido virales),动脉炎病毒科(Ateriviridae),动脉炎病毒属(Arterivirus)。PRRSV能够引起母猪繁殖功能障碍和新生仔猪呼吸道症状。2b蛋白是PRRSV中较小的结构蛋白,它可能在病毒脱壳时扮演某种离子通道的角色,与病毒感染过程有关,可以促使PRRSV粒子脱壳,释放RNA到宿主细胞内,但对病毒的装配不起作用。研究2b蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,对全面了解PRRSV感染机制与深入认识2b蛋白功能具有重要意义。在前期研究中,用含有PRRSV 2b基因构建的钓饵菌株与猪肺泡巨噬细胞(PAM)cDNA文库进行酵母双杂交,成功的筛选到了与其相互作用的凝集素-1(LGALS1)。本研究成功构建了pGADT7-LGALS1重组质粒,并转入Y187酵母感受态中,与含有2b基因的Y2H酵母菌株进行了酵母回返试验,结果显示在SD/-Trp-Leu-His-Ade/AbA/X-α-gal的平板上长出了蓝色菌落,说明两种蛋白间发生相互作用。在GST-pull down试验中,构建了带有GST标签的重组质粒pEGX-KG-2b和带有His标签的重组质粒pET-28a-LGALS1,通过转入大肠杆菌感受态BL21中进行原核诱导表达,蛋白经过纯化后,进行pull down试验,结果显示,PRRSV 2b与LGALS1之间发生相互作用。在免疫共沉淀试验中,构建了pCMV-HA-2b与pCMV-Myc-LGALS1真核表达重组质粒,并将其共同转染至HEK293细胞中培养,使细胞在非变性条件下裂解,通过免疫共沉淀的方法验证了PRRSV 2b与LGALS1之间发生相互作用。本研究利用酵母回返试验、GST-pull down试验、免疫共沉淀试验三种方法成功验证了LGALS1与PRRSV 2b蛋白间的相互作用,为研究PRRSV感染途径和增殖过程提供了理论基础。