目的：自1798年发现天花疫苗以来，人类已经研制出上千种疫苗用来预防和控制各种疾病。传统的疫苗包括减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素和亚单位疫苗。虽然这些疫苗的研发在很多疾病的预防和控制中已经取得了很大的成就，但是传统的疫苗也存在着死疫苗灭活不全和活疫苗毒力恢复等缺点，并且在许多胞内寄生病原的疫苗研发上这些途径表现出了很大的限制性。因此能够研制出更安全﹑有效﹑廉价并且易于推广的新型疫苗来弥补传统疫苗的缺陷是人们所面临的又一个新的挑战。随着DNA重组技术的出现和成熟，利用基因工程开发新疫苗是当前解决这些问题的最好途径。基因工程疫苗是用分子生物学技术对病原微生物的基因组进行改造,以降低其致病性,提高其免疫原性,或者将病原微生物基因组中的一个或多个对防病治病有用的基因克隆到无毒的原核或真核表达载体上制成疫苗,接种动物产生免疫力和抵抗力,达到防制传染病的目的。核酸疫苗又名基因疫苗或DNA疫苗，是基因疫苗的一种。肌肉注射是DNA疫苗的常用接种方式。骨骼肌是机体最大的细胞群，也是接种DNA疫苗的常用部位。骨骼肌接种疫苗后，其编码的蛋白质由多种细胞表达也包括骨骼肌细胞在内。如一些专职抗原提呈细胞可直接被转染转移至引流淋巴结并始动免疫应答，树突状细胞则可通过交叉抗原提呈途径将非免疫活性细胞产生的抗原提呈给免疫活性细胞诱导免疫应答。而肌细胞在DNA免疫中的作用在已有的实验研究结果中存在差异，一些研究发现转染的肌细胞MHCⅠ类分子和B7-1表达上调，认为它可能在维持专职抗原提呈细胞始动的免疫应答的程度和持续时间上起作用，而另一些研究则表明肌细胞表达的抗原导致的是CD8+T细胞的耐受。因此，总体来说肌细胞在DNA免疫中的作用仍有待我们进行更深入的研究和探讨。PD-1是负性调节因子，其配体为PD-L1和PD-L2。PD-L1可在专职抗原提呈细胞﹑非专职抗原提呈细胞及肌细胞表达。而PD-L2只在树突状细胞和巨噬细胞上呈诱导表达。PD-1/PD-L1为负性免疫调节信号通路，在很多慢性疾病感染过程中PD-1在特异性免疫活性细胞上高表达，并且使之功能失活，这说明肌细胞在DNA疫苗免疫后，一方面通过表达抗原通过交叉抗原提呈途径将抗原肽提呈给免疫活性细胞，诱导免疫应答。另一方面可能在建立自我保护的过程中提供负性信号抑制免疫应答。这可能是造成质粒DNA疫苗免疫保护作用不高的原因之一。基于上述考虑，本实验以小鼠肌细胞为研究对象，用质粒免疫小鼠，以观察小鼠肌细胞内相关因子PD-L1，CD80的变化情况，以探讨其在基因疫苗免疫中的作用及意义，为提高DNA疫苗的免疫保护作用开辟新途径。方法：⑴质粒免疫小鼠肌细胞：体重20g左右的C57BL/6小鼠，股四头肌肌肉注射质粒pcDNA3/VP-1(100ug/只)。⑵Trizol提取总RNA：分别在1天、3天、5天、7天提取总RNA，以DEPC水处理组作为正常对照组，进行Real Time PCR。结果：（1）用PCDNA3.0/VP1免疫小鼠后, Real Time PCR的结果显示实验组PD-L1的mRNA表达在3天的时候达到高峰，5天、7天时开始缓慢下降；实验组CD80的mRNA表达在3天时达到高峰，其余时间都维持在较低的水平；对照组的PD-L1和CD80则普遍维持在较实验组低的水平；对照组的CD80水平较PD-L1高。结论:(1)质粒DNA免疫C57BL/6小鼠肌细胞后使得小鼠肌细胞内的PD-L1及CD80mRNA表达出现波动性的变化。（2）与对照组相比，实验组的PD-L1及CD80的mRNA表达普遍上调。（3）正常肌肉组织内也构成性表达PD-L1和CD80，且CD80的表达水平较PD-L1高。