基于PCR-DGGE技术的新疆泥火山土壤真菌多样性分析

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wzhyskoa
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新疆有全亚洲最大的泥火山群,泥火山地质结构特殊,环境气候恶劣,周围有出现煤矿和油田,是研究极端微生物资源的理想场所,也是寻找工业可利用微生物的研究方向。通过对新疆乌苏泥火山土壤真菌的多样性研究,可明确其真菌种群多样性及规律。本研究采用了DNA指纹图谱技术结合传统的培养方法,阐述了泥火山土壤真菌群落结构和动态变化,及其与环境的相关因素。探索出泥火山极端环境下可利用的微生物资源,为其进一步的开发研究打下基础,同时也为我国极端微生物资源的研发提供了宝贵的研究材料。可培养真菌常规鉴定结合ITS序列分析。总共分离得到已知菌属13属,10种,24株真菌。所得菌中有少数的嗜碱菌,1株未知菌种为嗜酸菌(NO.3)初步判定可能为单格孢属(Monodictys)的新种。2株属于子囊菌门(Ascomycota),3株为接合菌门(Zygomycota),其余菌属均属于半知菌门(Duteromycota)。其中以半知菌门(Duteromycota)的细基链格孢属(Alternaria tenuissima)和接合菌门多枝横梗霉属(Lichtheimia ramosa)分离频率最高,几乎分布在所有土层中;其次是子囊菌门(Ascomycota)的曲霉属(Aspergillus)分离较多。未分离到壶门菌(Chytridiomycota)和担子菌(Basidiomycotd)。在非培养的实验阶段,通过PCR-DGGE指纹图谱技术,对不同季节,不同深度样品的18SrDNA进行电泳分离,运用Quantity one软件对图谱进行聚类分析,并对主要条带进行回收测序。结果表明泥火山真菌虽然环境恶劣条件不适宜真菌的大量繁殖,但其漫延物中仍有较明显的多样性,而且其优势菌群为多枝横梗霉属(Lichtheimia ramosa)与细基链格孢属(Alternaria tenuissima)。5月份的真菌多样性最为丰富,不同深度土壤,不同喷发口的真菌多样性季节内变化不大;同一深度同一喷发口,在不同季节之间真菌组成差异较大,而且真菌数量和种类随着气候的更替在减少:可见泥火山真菌受环境气候的影响比较大,但其优势菌种受此影响较小在研究过程中发现,在分离培养基中加入少量采样点的土壤浸液或水样,可使营养条件更接近自然环境,而且采用多种分离方法结合,更有利于从特殊生境中分离真菌,尽可能客观全面的得到泥火山可培养真菌。通过研究泥火山漫延物的理化性质和环境分析,总体可知泥火山土壤微生物长年处于低温强碱环境数量较少,而且土壤的酶活和矿物元素含量都偏低,营养贫瘠,高盐碱不适合土壤真菌大量繁殖。泥火山真菌的多样性较低。进一步了解了泥火山极端环境对土壤微生物的影响;更有利于我们得到这一特殊生境蕴育的形态多样,功能特异真菌的资源,发现新种。初步建立了泥火山极端微生物分类体系,丰富了我国的极端微生物资源。
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