【摘 要】
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目的： 研究来源于节律蛋白mCLOCK DNA结合结构域的穿膜肽mCLOCKsDNA-BIND(CDB)的生物安全性。 方法： 实验一、穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND穿膜作用及细胞毒性的研究化学
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目的：
研究来源于节律蛋白mCLOCK DNA结合结构域的穿膜肽mCLOCKsDNA-BIND(CDB)的生物安全性。
方法：
实验一、穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND穿膜作用及细胞毒性的研究化学合成穿膜肽CDB。N端标记FITC绿色荧光素，与小鼠NIH3T3细胞孵化，荧光显微镜下观察CDB的穿膜作用，采用Image-Pro Plus(Version 4.5 forWindows)来分析细胞荧光强度；采用MTT法测定CDB的细胞毒性。
实验二、穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND对近日节律的影响体外诱导NIH3T3细胞的近日节律后，于诱导后不同时间点，将CDB与小鼠NIH3T3细胞共孵育，半定量RT-PCR检测其对近日节律核心元件mPeriod1表达的影响。
实验三、穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND对细胞周期、细胞增殖和凋亡的影响体外培养的NIH3T3细胞，与CDB共孵育，MTT法检测其对细胞增殖的影响，流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的作用。同时，体外采用PMA诱导细胞的近日节律。于诱导后不同时间点，将CDB与小鼠成纤维细胞共孵育，MTT法检测其对细胞增殖活性的影响，流式细胞术检测其对细胞周期、增殖速度和凋亡的作用。
结果：
实验一、CDB能有效的进入细胞，其穿膜量随孵化时间和浓度的增加而增加。CDB与细胞孵化后，细胞生长未见明显抑制。
实验二、CDB与体外PMA诱导近日节律的NIH3T3细胞在不同时间点孵育后，CDB没有明显影响PMA诱导的NIH3T3细胞节律基因(mPeriod1)表达。
实验三、CDB不干扰NIH3T3细胞的增殖及生长周期，亦无明显的诱导凋亡作用。
结论：
穿膜肽CDB对细胞近日节律、生长周期、细胞增殖及细胞凋亡均无明显影响，可望作为一种安全有效药物载体，具有广泛的临床应用前景。
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