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目的:观察U251胶质瘤干细胞在体外的生长特征;分析IL-13Ra2及Nanog基因在人脑胶质瘤干细胞中表达及意义,为进一步研究脑胶质瘤靶向治疗奠定实验基础。
方法:
1.U251胶质瘤细胞株中脑肿瘤干细胞的分离培养和鉴定:U251细胞株,分别应用含血清培养(DMEM/F12+10％FBS)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF和EGF)培养,通过无血清悬浮培养方法,从胶质瘤细胞株U251中分离培养肿瘤干细胞,观察其增殖、分化,用免疫荧光法鉴定脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133。
2.用Trizol提取细胞总RNA,采用RT-PCR法分别检测IL-13Ra2及Nanog基因在U251和胶质瘤干细胞上的表达情况,利用凝胶电泳成像系统拍照并分别测定各阳性条带的积分光密度(IOD)值,计算出相对比值进行半定量比较。通过统计学分析(t检验),判断IL-13Ra2及Nanog基因表达情况有无差异。
结果:
1.从胶质瘤细胞株U251中成功培养分离出了胶质瘤干细胞,在无血清培养状态下呈悬浮生长,经免疫荧光鉴定这些肿瘤球呈CD133阳性。
2.通过RT-PCR法检测,IL-13Ra2在胶质瘤干细胞中表达量为0.423+0.031,而在U251细胞中表达量为0.213±0.029,两者存在差异,有统计学意义(t=11.022,p<0.01)。Nanog在胶质瘤干细胞中表达量0.498±0.067,而在U251细胞中表达量为0.297±0.027；两者存在差异,有统计学意义,(t=6.236,p<0.01)。
结论:
1.U251细胞株中可以成功培养出CD133阳性的肿瘤干细胞球。
2.IL-13Ra2及Nanog在肿瘤干细胞中相对高表达。
3.IL-13Ra2可能在胶质瘤的发生、发展中起重要作用。
4.Nanog可能是胶质瘤干细胞维持未分化状态的重要因素之一。