镶边海星化学成分与生物活性研究

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本文首次对我国南海三亚海域的镶边海星(Craspidaster sp.)中的皂苷类成分进行系统的研究。以稻瘟霉生物活性及靶向Notch信号通路生物活性筛选模型,进行活性追踪,用65%EtOH对粉碎的海星进行回流提取,减压浓缩后均匀分散于水中,用石油醚和正丁醇进行萃取,浓缩正丁醇得海星总皂苷。海星总皂苷粗提物通过正相硅胶、反相硅胶及葡聚糖凝胶LH-20柱层析进行分离纯化。用薄层(TLC)层析法检测把相同的洗脱液收集在一起,得到所需要的有效部位。最后通过半制备高效液相色谱对薄层层析板显示的同一斑点的部分进行纯化获得单体化合物。海星用65%EtOH提取,可将绝大部分极性较大的化学成分提取出来,然后用石油醚脱脂,再用正丁醇萃取皂苷类物质,剩余的水相部分主要是蛋白质、糖等物质。通过稻瘟霉生物活性筛选知海星乙醇粗提物、海星总皂苷均具有抗有丝分裂活性,而石油醚粗提物没有显著的活性。然后通过靶向Notch信号通路生物活性筛选模型发现,正丁醇萃取部分对Notch信号通路有很好的抑制作用,进一步将正丁醇部分用正向硅胶柱层析进行初步纯化后,发现其Notch信号通路的抑制作用明显增强。这进一步说明具有Notch信号通路的抑制作用的物质可能主要存在于正丁醇萃取部分中。同时也提示了可能海星皂苷通过抑制Notch信号通路来起到抗肿瘤。因海星皂苷类无紫外吸收或紫外吸收比较弱,为避免丢失部分皂苷类成分,我们选择RID示差折光检测器,色谱柱为Zorbax300 SB-C18柱(9.4mm i. d.×250 mm)的半制备型高效液相色谱仪。通过用半制备型RP-HPLC对海星中皂苷类成份的分离纯化条件进行了探索,在综合考虑高效色谱峰的保留时间、峰型、纯度以及得率等因素,找到分离制备化合物最优的色谱条件。通过最佳制备条件纯化得到海星皂苷单体化合物10个。均为无色结晶性粉末,用薄层色谱(TLC)检测,氯仿/甲醇/水(6.5:3.5:1)展开,用15%硫酸-乙醇浸润,加热显褐色斑点。应用现代波谱技术(1H,13C-NMR,DEPT,1H,1H-COSY, HMQC,HMBC,TOCSY, NOESY,ESI-MS,HR-ESI-MS等)和化学手段等鉴定出其中4个海星皂苷类化合物结构,其中3个为新的化合物1个为首次从镶边海星中得到的化合物。3个新化合物的结构分别为:(20R)-7-O-(6-O-methyl--β-D-galactofuranosyl)-16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-22(23)-dine-3α,6β,7β,16α-tetrol,命名为anthenoside K1(1)。(20R)-7-O-(6-O-methyl-β-D-galactofuranosyl)-16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-en-3α,6β,7β,16α-tetrol,命名为anthenoside K2(2)。(20R)-7-O-(6-O-methyl--β-D-galactofuranosyl)-16-O-(3-O-methyl-β-D-galactopyranosyl)-5α-cholest-8(14)-24(28)-diene-3α,6β,7β,16α-tetrol,命名为anthenoside K3(3)。1个首次从镶边海星中得到的化合物为novaeguinoside A。  本课题首次用靶向Notch信号通路生物活性筛选模型及半制备反相高效液相色谱对我国南海三亚海域的镶边海星中的海星皂苷的分离纯化进行系统研究、报道,并首次从镶边海星中分离制备得到海星皂苷 novaeguinoside A,首次制备并确定三个新的海星皂苷anthenoside K1(1)、anthenoside K2(2)、anthenoside K3(3)。这为进一步研制开发新型抗肿瘤药物提供了有价值的先导物。也为天然有机化学积累了新的化合物,并为为在我国资源丰富的有害生物海星的开发利用具有重要意义。
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