人MMP-2催化结构域和FN样结构域的克隆与表达

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基质金属蛋白酶(MMP)是一类依赖于Zn<2+>、结构与功能相关的内肽酶.一般地,MMP含有信号肽、前肽结构域和催化结构域.除了MMP-7外,所有MMP还含有血红素结合蛋白样结构域.MMP对细胞外基质成分的降解是新血管形成的必要步骤,也促进了肿瘤的侵袭和转移.MMP-2属于MMP家族,它被认为与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关.为了研究MMP-2全长cDNA的质粒中分别扩增了人MMP-2的催化结构域(MCD)和FN样结构域(MFN),序列分析结果表明均无氨基酸突变.然后,构建MCD和MFN的表达载体pET-MCD和pET-MFN,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组和MCD和MFN.其中,重线的MCD依次经包涵体分离、变性、金属螯合层析纯化和复性等过程后.酶谱分析结果表明MCD具有较好的明胶水解活性.
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