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鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）,俗称冈伯罗病,是由鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种重要的经济性、急性和高传染性免疫抑制疾病。IBDV主要损伤鸡的法氏囊,在宿主法氏囊和其他淋巴组织复制,造成B淋巴细胞的坏死和崩解,从而引起感染鸡免疫抑制。由于疫苗的广泛使用和饲养管理水平的逐步提高,IBDV超强毒株（vv IBDV）所致的IBD已得到了良好的防控,但近年来由于IBDV变异毒株的出现,使IBD的发生和流行呈现新的特点,传统疫苗不再能完全保护雏鸡IBDV感染,给养禽行业带来了新的攻克难题。因此本研究从已免疫的发病肉鸡中分离鉴定IBDV变异毒株,建立感染模型检测其致病性,并验证针该变异株,现有商品疫苗产生的母源抗体水平对肉雏鸡的免疫保护作用,从而为临床防控该病提供参考。具体试验内容和结果如下:1.鸡传染性法氏囊病毒变异株的分离鉴定（1）本研究从已免疫的发病肉鸡的法氏囊中分离鉴定了一株IBDV,并通过鸡胚传代获得了稳定的IBDV鸡胚毒,将其命名为IBDV-FJNP。传代过程中鸡胚病变表现为胚体水肿、出血,肝脏呈坏死性斑点,尿囊膜增厚明显,尿囊液呈胶冻状。病毒在细胞上传代培养发现该毒株难以在CEF细胞上生长。（2）通过动物回归试验发现,该分离株感染1日龄SPF雏鸡未出现明显的临床症状,但可引起法氏囊明显的萎缩,偶见法氏囊出血、黄染等病变,随着病程的逐渐发展,可见脾脏肿大明显,肾脏偶见尿酸盐沉积,胸肌腿肌轻微出血,胸腺有轻微点状出血等病变。这些数据表明,IBDV-FJNP分离株对雏鸡具有明显的致病性。2.VP2基因的序列分析与IBDV新型基因型分类（1）对IBDV-FJNP分离株的VP2基因的核苷酸序列进行测定与分析,结果发现,在36株参考毒株中,该毒株与强毒株、变异株、减毒株、经典毒株和血清Ⅱ型的同源性范围分别为92.4%～93.4%,92.7%～98.3%,93.4%～95.3%,93.9%～94.1%,81.1%～81.3%。其中,与国内分离到的新的变异毒株SHG165同源性最高,达到98.3%;遗传演化分析显示,该毒株与变异株在同一个分支,而且与国内已公布的新型变异株形成一个独立亚群。（2）对VP2基因高变区的氨基酸序列比对结果显示,该毒株在VP2基因的高变区共有14个特征性的氨基酸位点,分别为213N、221K、222T、242V、249T、252I、254N、256V、279N、286I、294L、299S、318D、323E。在这些位点中,有三个与早期变异株相同的位点,分别为222T、286I、318D。不同的是,参考变异株的第249位均为K,该毒株则为T。此外,该毒株还具有三个新型变异株典型的氨基酸位点,分别为221K、252I、299S。（3）根据IBDV的新型基因型分类方案对该毒株基因分型,基于A节段VP2基因的高变区进行分类,发现该毒株属于A2d基因型;基于B节段基因代表性片段进行分类,发现该毒株属于B1基因型。因此,IBDV-FJNP属于A2d B1基因型,即新型变异株类群。这些结果表明,IBDV-FJNP分离株是一株IBDV新型变异毒株。3.IBDV-FJNP分离株动物感染模型的建立将该毒株病毒原液进行10倍倍比稀释,通过每个稀释度接种9日龄SPF鸡胚,按照Reed-muench法计算出EID50为10-5.75/0.2 m L。该毒株分别感染1日龄、7日龄、14日龄和21日龄四个不同日龄的SPF鸡,发现在感染1日龄的SPF鸡时,病鸡发病特征尤为明显,主要表现为:（1）所有发病鸡未出现死亡现象,1日龄感染时发病率80%,临床症状轻微,常见白色稀便和水样腹泻,成团呆立和精神沉郁症状;7日龄感染时发病率60%,偶见稀便和腹泻,未见明显精神症状;14日龄和21日龄感染时,发病率为35%,未见明显临床症状,偶见剖检法氏囊萎缩和脾脏肿大;（2）BBIX和脾体比分析结果显示,1日龄感染时法氏囊萎缩显著,脾脏明显肿大,大腿内侧肌肉和胸部肌肉出血,偶见肾脏肿大,胸腺点状出血,腺胃乳头糜烂出血等。3 dpi～13 dpi,四个感染组在法氏囊和脾脏中均可检测到病毒,且法氏囊病毒复制水平明显高于脾脏;（3）病理切片表现为1日龄感染时,法氏囊结构受到了严重的损伤。5 dpi,固有层内广泛可见淋巴滤泡萎缩,排列疏松,皮髓质分界不清,淋巴细胞数量大量减少;7 dpi,可见较多淋巴细胞坏死,数量减少,间质结缔组织排列疏松;10 dpi,可见淋巴滤泡萎缩、消失,结构不清;13 dpi,法氏囊上皮细胞变性,胞质疏松淡染,滤泡皮髓质分界不清,淋巴细胞减少。以上结果表明,IBDV变异株感染1日龄雏鸡时致病特点明显,虽然呈临床症状轻微,但已经严重破坏雏鸡的法氏囊,进一步说明IBDV变异株对雏鸡的致病性及其危害。4.IBDV-FJNP分离株感染雏鸡时母源抗体对其的保护性免疫作用为了探究母源抗体能否有效预防雏鸡不受IBDV-FJNP分离株的感染,对7日龄母源抗体水平为4 000左右的雏鸡,以不同的攻毒剂量进行人工感染。结果显示,以105.75EID50/只的剂量进行攻毒,发现母源抗体无法提供完全保护,有少数鸡表现出轻微的特征病变,而用102.75EID50/只和10-0.25EID50/只的剂量进行攻毒时,雏鸡未表现出任何发病症状,法氏囊未见明显萎缩。表明对于母源抗体水平较高的鸡来说,可以预防一定毒量的IBDV-FJNP变异株的感染,但一旦超过一定程度,便仍能突破母源抗体的保护使雏鸡感染,为临床精准防控该病提供了参考。