结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。该病是目前世界上单一致病菌感染导致病死率最高的疾病之一。近年来随着人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的广泛流行以及多重耐药菌株的出现使得结核病变的复杂和难以防控。　　NF-κB(nuclear factor-κB)是广泛存在于各种类型细胞中的一种转录因子，调控许多基因的转录，在免疫应答、炎症反应和细胞凋亡中发挥重要作用。　　MTB致病机制复杂，分泌蛋白、脂蛋白、跨膜蛋白等介导细菌与宿主的相互作用，与宿主接触过程中能破坏宿主组织，引起一系列级联反应，在MTB致病过程中起重要作用，并影响宿主免疫防御。MTB能通过调节NF-κB活性来调节细胞的坏死和凋亡，然而具体的机制不是很清楚。本研究以NF-κB信号转导途径为切入点，筛选调控NF-κB的MTB分泌蛋白、脂蛋白、膜蛋白，分析其调控NF-κB的信号转导途径以及生物学意义，从而为进一步阐明结核分枝杆菌的致病机制和免疫机理奠定基础。主要研究内容如下:　　1.目的基因的选择与真核表达质粒的构建　　通过生物信息学方法以及结核的蛋白质组学查找MTBH37Rv菌株的分泌蛋白、膜蛋白、脂蛋白，选择了160个蛋白基因作为候选基因。其中分泌蛋白135个，膜蛋白10个，脂蛋白15个。　　利用PCR和酶切的方法将候选基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中，成功构建了各目的基因的真核表达质粒。　　2.调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白筛选　　将构建好的160个真核表达质粒分别转染细胞，通过荧光素酶报告系统筛选能够调控NF-κB活性的结核分枝杆菌蛋白，结果证实MTBRv2185c蛋白（分泌蛋白）能显著激活NF-κB，并具有剂量依赖性和细胞特异性;而MTBRv3763蛋白（脂蛋白）显著抑制TNF-α诱导的NF-κB活性，呈剂量依赖性，但不具有细胞特异性。进一步构建MTBRv2185c、Rv3763不同区域缺失的突变体并对其调控NF-κB活性的能力进行研究，结果只有全长的MTBRv2185c具有诱导NF-κB活性的能力，而Rv3763的前30个氨基酸对于抑制TNF-α诱导的NF-κB活性至关重要。　　3.MTBRv2185c促进P65磷酸化　　将构建的表达MTBRv2185c的真核质粒转染细胞，转染30h后通过Western-blot检测NF-κBp65亚基磷酸化的变化情况。结果发现MTBRv2185c促进p65的磷酸化。　　4.Rv3763抑制TNF-α诱导的p65磷酸化　　将构建的表达MTBRv3763的真核质粒转染细胞，转染24h后用TNF-α刺激6h，并通过Western-blot检测NF-κBp65亚基磷酸化的变化情况。结果发现MTBRv3763抑制TNF-α诱导的p65磷酸化。