基于大分子表面交联微米化磁性纳米粒子及其在生物样本分离中的应用

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本文就Fe3O4磁性纳米粒的制备及其表面功能化、微米级磁珠的制备以及其在DNA分离纯化中的应用进行相关研究。利用经典的化学共沉淀法制备出表面富含羟基的水溶性良好的Fe3O4磁性纳米粒,该纳米粒近球形,粒径在15nm左右,但存在一定程度的团聚现象。而后分别采用原位法和后处理法用聚乙烯亚胺(PEI)和硅烷偶联剂3-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(KH560)对Fe3O4粒子进行表面修饰,得到氨基化和硅烷化的磁性纳米粒,可改善粒子的分散性,同时带上活性氨基、环氧基活性基团。利用大分子聚乙烯亚胺(PEI)和聚丙烯酸(PAA)对表面功能化的磁性纳米粒进行交联,制备出三种(Fe3O4-KH560-PEI、Fe3O4-PEI-BDE-PEI、Fe3O4-PEI-PAA)不同的微米级磁珠,并分别对其粒径、电位、形貌、磁响应性、悬浮稳定性等性质进行表征和比较,综合得出Fe3O4-KH560-PEI磁珠性能最优,显著改善粒子的磁响应性,磁分离1min其剩磁率可降至12.24%,2min降至5.86%;同时由于表面富含氨基,电荷明显,在水中分散稳定,30min后溶液中仍悬浮有97.18%的粒子;与医用磁珠相比,该磁珠形貌不规则,大小不均匀,粒径较小,单个磁珠含有较少的磁性纳米粒,磁响应性略差;但粒径小能有效减少反应的空间位阻,提高反应的灵敏度;表面含有大量氨基,利于与其他活性物质连接,可扩大其应用。以性能良好的Fe3O4-KH560-PEI磁珠为载体,以鲱鱼精子DNA为模板DNA,考察Fe3O4-KH560-PEI磁珠对DNA的分离性能,利用静电相互作用磁珠在低pH下吸附DNA,在高pH下解吸附DNA,实现DNA的分离纯化。通过对吸附、解吸附作用影响因素(如pH、时间、温度、离子强度等)的考察,得出吸附、解吸附的最佳条件分别为pH=3、37℃、不加盐、反应10min和pH=11、37℃、不加盐、反应10min。实验结果表明使用该磁珠可通过磁场对DNA进行快速分离,简单快捷;对DNA的固载量可达629.49 mg/g;同时磁珠还可循环利用,经六次使用其吸附率仍保持在50%以上,有望在实际应用中凸显其优势。
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