胚胎干细胞（ES）具有多向的分化潜能，可以作为组织工程种子细胞有效的来源。本研究采用不同的诱导剂AA+β-磷酸甘油+1,25-二羟VD3或者Dex诱导ES-D₃细胞向成骨细胞定向分化，培养基中诱导剂的添加以及胎鼠成骨细胞与ES-D3细胞共培养增加了分化的成骨细胞的数量。本研究皆在为研究成骨细胞的发生以及建立稳定的ES-D3向成骨细胞分化体系奠定了基础。试验主要结果如下： 1．通过对体外长期培养的ES-D₃细胞初步鉴定得到，该细胞系具有典型的集落形态，AKP染色强阳性，以及保持88.1％以上的正常的二倍体核型。 2．采用酶消化联合组织块培养法分离的胎鼠头盖骨成骨细胞体外连续培养最多达到13d，AKP和茜素红S染色阳性均表现阳性结果。生长曲线测定表明，成骨细胞的增殖符合细胞正常的生长规律。 3．类胚体（EBs）贴壁后，在成骨细胞诱导剂的作用下，各组进行茜素红S染色均得到阳性结果，矿化的骨结节计数时试验组形成的骨结节数均多于对照组，其中，B组(50μg／rnLAA+50mmol／Lβ磷酸甘油+5×10^-8M的1，25-二羟维生素D3)形成的骨结节数达到60±5个（P＜0.05）；C组（50μg／rnLAA+50mmol／Lβ磷酸甘油+1μmol／LDex）形成的骨结节数达到68±9个（P＜0.05）。结果表明在β磷酸甘油和AA存在的情况下，Dex比1,25-二羟维生素D3具有更明显的诱导ES-D3细胞向成骨细胞诱导分化的效果。D组胎鼠成骨细胞和ES-D3细胞共培养，矿化骨结节数为47±2个（P＜0.05），A组对照组20±8（P＜0.05）． 4．各组在EBs贴壁后每隔5d进行AKP表达含量测定时，AKP的表达呈现下降，然后上升的趋势。