纳豆激酶高产菌株筛选及发酵工艺优化研究

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纳豆激酶(Nattokinase简称NK)是由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtils natto)代谢产生的一种丝氨酸蛋白,于1987年由日本学者须见洋行在纳豆食品中发现并取名。纳豆激酶具有良好的溶解血栓的功效,与传统的溶栓药物链激酶、尿激酶相比具有药理作用直接且多元化、体内半衰期长、分子量相对较小可直接通过胃肠系统被人体吸收、安全性高、价格便宜等诸多优点。因此就如何提高纳豆激酶活性这一研究在世界范围内引起普遍关注。本实验从日本进口的纳豆食品中分离得到了一株产纳豆激酶较高的菌株,并通过紫外线照射对该菌株实施诱变,根据纳豆芽孢杆菌致死曲线确定菌株的诱变照射时间。经多次诱变之后,得到产酶能力更高的菌株(暂命名YNS-1)。以筛选诱变后的高产菌株为出发菌株,对高产纳豆激酶发酵培养基组成及培养条件实施优化,优化后的发酵培养基成分及培养条件如下:发酵培养基的最佳氮源为发芽豆粉,添加量为8g/100mL;最佳碳源为葡萄糖,添加量为2%;MgSO4最佳添加量为0.05%;最适发酵温度为38℃;最适pH为7;发酵菌种培养24h接种,接种量为2%;采用摇瓶发酵时,摇床转速最佳值为150r/min,三角瓶的装液量为200mL/500mL,经过三天发酵,纳豆激酶的酶活力达到最大值。最后通过对比性实验,验证了经诱变后的菌株在优化发酵培养基中具有最高的酶活产量,酶活力可以达到846IU/mL,与实验室原有菌株在普通发酵培养基内相比,酶活力提高了53.23%。从而以证明,本实验经过菌株筛选诱变及培养基优化,达到了高产纳豆激酶菌株筛选诱变和工艺条件优化的研究目的。
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