论文部分内容阅读
研究目的:分析人白细胞抗原G（HLA-G）、杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4（KIR2DL4）在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性;并探讨CD57阳性自然杀伤（CD57+NK）细胞与HLA-G、KIR2DL4之间的相关性及其临床意义;旨在寻找出结直肠癌发生发展的新的预测指标。研究方法:1、收集兰州大学第二医院普外科于2017年4月至2017年8月行结直肠癌根治术的蜡块标本以及对应患者的临床资料。利用免疫组化的方法分析HLA-G、KIR2DL4、CD57+NK细胞在结肠癌组织中的表达,统计分析了三者的表达与临床病理的相关性。收集患者的预后资料,用Kaplan-Meier法制作生存曲线,分析三者对患者预后的影响。2、通过PCR、WB方法验证正常结直肠上皮细胞株NCM460、结直肠癌细胞株RKO、HT-29、SW620中HLA-G、KIR2DL4的表达情况。研究结果:1、HLA-G在结直肠癌组织中的高表达率为44%（29/66）,HLA-G表达增高与血CEA（χ~2=5.274,P=0.022）、淋巴转移（χ~2=17.776,P=0.000）、肿瘤N分期（χ~2=9.195,P=0.010）、AJCC临床分期（χ~2=18.082,P=0.000）、CERB-2（χ~2=7.912,P=0.005）有关。KIR2DL4在结直肠癌组织中的高表达率是32%（21/66）,KIR2DL4表达增高与神经脉管侵犯有关（χ~2=9.984,P=0.003）。2、通过Kaplan-Meier分析结果显示,HLA-G与KIR2DL4在结直肠癌组织中的表达水平与患者的预后相关。HLA-G低表达组与高表达组患者的3年生存率分别为91.7%、53.6%,差异具有统计学意义（χ~2=11.594,P=0.001）。KIR2DL4低表达组与高表达的患者的3年生存率分别为83.7%、57.1%,差异具有统计学意义（χ~2=4.847,P=0.028）。3、通过Spearman相关性分析,HLA-G与KIR2DL4的表达呈正相关（r=0.313、P=0.011）,发现HLA-G与KIR2DL4在结直肠癌组织中存在共高表达情况。HLA-G、KIR2DL4共高表达（HLA-G+/KIR2DL4+）与血CEA、淋巴转移更具有相关性。HLA-G+/KIR2DL4+提示患者的预后更差（χ~2=17.324,P=0.001）。4、单因素分析得出患者的肿瘤分化程度（HR=0.210,95%CI:0.072～0.651,P=0.017）、淋巴转移（HR=0.111,95%CI:0.025～0.488,P=0.039）、临床分期（HR=0.390,95%CI:0.035～4.307,P=0.024）、HLA-G（HR=0.154,95%CI:0.044～0.541,P=0.004）、KIR2DL4（HR=0.350,95%CI:0.130～0.942,P=0.038）都是影响患者预后的因素,然后通过多因素COX风险模型分析得出结直肠癌的分化程度、HLA-G的表达水平是结直肠癌患者预后的独立危险因素。5、相比较于NCM460,HLA-G、KIR2DL4在RKO、HT29、SW620中表达水平更高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。6、CD57+NK细胞在结肠癌组织中的高表达率为52%（34/66）,CD57+NK细胞高表达与患者的年龄（χ~2=4.061,P=0.044）、肿瘤最大直径（χ~2=11.859,P=0.001）、肿瘤分化程度（χ~2=8.105,P=0.017）等有关。通过Spearman相关性分析,CD57+NK细胞与KIR2DL4的表达呈负相关性（r=-0.249、P=0.044）。通过Kaplan-Meier分析,CD57+NK细胞低表达组与高表达组的3年生存率为分别62.5%、87.5%,差异具有统计学意义（χ~2=5.203,P=0.023）。研究结论:1、HLA-G在结直肠癌组织及细胞中高表达,它的高表达与患者的血CEA水平、淋巴转移、肿瘤N分期、AJCC临床分期、CERB-2以及总生存期有关,可作为判断患者预后的指标。2、KIR2DL4在结直肠癌组织及细胞中高表达,它的高表达与肿瘤侵犯神经脉管以及生存时间有关。3、HLA-G与KIR2DL4在结直肠癌中存在共高表达,共高表达的患者预后结果更差。4、CD57+NK细胞的表达水平与结直肠癌的预后密切相关,可用于评估结直肠癌的免疫微环境以及为结直肠癌的免疫治疗提供新思路。