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第一部分周期性机械应力下大鼠软骨细胞面积的扩增和迁移目的探讨周期性机械应力对大鼠软骨细胞面积扩增和迁移的影响。方法取SD乳大鼠四肢关节软骨细胞体外培养至第二代,在有、无周期性机械应力(我们自主研发的“周期性应力场灌注式培养系统”, 0-200KPa,0.1Hz)条件下分别培养0h、0.5h、1h、2h,采用Image-Pro Plus 5.0软件检测细胞面积；同时取相同条件的大鼠软骨细胞,在有、无周期性机械应力条件下培养12h,采用划痕愈合法检测细胞迁移能力。结果周期性机械应力下,软骨细胞面积显著扩增,迁移能力明显增加,且差异具有统计学意义(p<0.05)。结论周期性机械应力能促进大鼠软骨细胞面积明显扩增和迁移。第二部分周期性机械应力下大鼠软骨细胞中Src, PLCγ1和ERK1/2信号蛋白的影响目的探讨周期性机械应力作用下大鼠软骨细胞中Src, PLCγ1和ERK1/2信号蛋白的变化。方法取SD乳大鼠四肢关节软骨细胞体外培养至第二代,在有、无周期性机械应力(我们自主研发的“周期性应力场灌注式培养系统”, 0～200KPa,0.1Hz)条件下分别培养0h、0.5h、1h、2h。采用Western bloting检测Src、PLCγ1、ERK1/2三种激酶的表达和磷酸化水平。结果在周期性机械应力作用下,在各时间点Src、PLCγ1、ERK1/2的磷酸化水平较不加压组均明显增高,差异均具有统计学意义(p<0.05 for each;n=5)。结论周期性机械应力能引起大鼠软骨细胞中Src、PLCγ1、ERK1/2的磷酸化水平的提高。第三部分周期性机械应力下大鼠软骨细胞中Src, PLCγ1和ERK1/2信号蛋白对软骨细胞面积扩增和迁移的影响目的探讨周期性机械应力下大鼠软骨细胞中Src, PLCγ1和ERK1/2信号蛋白对软骨细胞面积扩增和迁移的影响。方法取SD乳大鼠四肢关节软骨细胞体外培养至第二代,在周期性机械应力(我们自主研发的“周期性应力场灌注式培养系统”,0-200KPa,0.1Hz)条件下,分别给予Src-Tyr418位点的抑制剂PP2、PLCγ1-Tyr783位点的抑制剂U73122、和ERK1/2-Thr202/Tyr204位点的抑制剂PD98059进行预处理,然后分别培养0h、0.5h、1h、2h,采用Image-Pro Plus 5.0软件检测细胞面积情况。同时取相同条件的大鼠软骨细胞,给予PP2、U73122和PD98059预处理后,在周期性机械应力条件下培养12h。采用划痕愈合法检测细胞迁移能力。结果在周期性机械应力作用下,PP2、U73122和PD98059预处理后细面积扩增和迁移均被抑制,且差异具有统计学意义(p<0.05 for each)。结论周期性机械应力下Src, PLCγ1和ERK1/2是引起的细胞面积扩增和迁移过程中重要的信号蛋白。第四部分周期性机械应力下大鼠软骨细胞中Src,PLCγ1,ERK1/2信号蛋白之间的关系目的探讨周期性机械应力下大鼠软骨细胞中Src, PLCγ1和ERK1/2信号蛋白之间的上下游关系。方法取SD乳大鼠四肢关节软骨细胞体外培养至第二代,在周期性机械应力(我们自主研发的“周期性应力场灌注式培养系统”,0～200KPa, 0.1Hz)条件下分别给予Src-Tyr418位点的抑制剂PP2、PLCγ1-Tyr783位点的抑制剂U73122、和ERK1/2-Thr202/Tyr204位点的抑制剂PD98059进行预处理,然后分别培养0h、0.5h、1h、2h,采用Western bloting检测ERK1/2、PLCγ1、Src三种激酶的表达和磷酸化水平。结果PP2预处理后PLCγ1-Tyr783、ERK1/2-Thr202/Tyr204位点的磷酸化均被抑制(p<0.05 for each)。U73122预处理后ERK1/2-Thr202/Tyr204位点的磷酸化被明显抑制(p<0.05 for each),而Src-Tyr418位点的磷酸化则不受影响(p>0.05)。PD98059预处理后Src-Tyr418、PLCγ1-Tyr783位点的磷酸化则未受影响(p>0.05)。结论在周期性机械应力的作用下,软骨细胞中的Src首先被磷酸化,然后引起PLCγ1的活化,后者又导致了ERK1/2的磷酸化。