宫颈癌中Drosha的功能及其对蛋白组学的影响

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目的:检测Drosha在宫颈癌细胞中的表达及其表达所致的细胞功能的变化和蛋白组学变化。  方法:应用慢病毒载体将短发夹RNA转染至宫颈癌细胞系中降低其Drosha表达水平(Droshaknockdown,Dro-KD)。用MTT实验和克隆形成实验检测Drosha表达水平变化对宫颈癌细胞增殖的影响,用划痕试验和迁移试验检测Drosha表达水平变化对宫颈癌细胞迁移的影响。双向电泳及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析检测Drosha表达水平改变后细胞蛋白组的变化。  结果:DroshamRNA在宫颈癌细胞中较正常宫颈上皮细胞升高60~120倍不等。利用慢病毒导入sh-Dro2936可降低宫颈癌中Drosha表达。Dro-KD导致宫颈癌细胞增殖活性及克隆形成能力受到抑制。迁移实验及划痕实验结果表明Dro-KD使宫颈癌细胞迁移能力受到抑制。双向电泳显示Dro-KD后宫颈癌细胞中蛋白点数量明显增多。质谱分析21个差异蛋白点检出包括Tubulin5beta在内的19种差异蛋白,其中13种蛋白与肿瘤相关,2种与病毒感染相关。  结论:Drosha在宫颈癌细胞中高表达。抑制宫颈癌细胞中Drosha的表达能够明显降低宫颈癌细胞增殖和迁移能力。其表达水平对宫颈癌细胞的蛋白组表达产生影响。
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