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目的将子宫内膜癌及正常的子宫内膜作为对照,比较子宫内膜异位症异位内膜的迁移和侵袭能力。探究小剂量甲氨蝶呤是否影响子宫内膜异位症异位内膜HS 832.Tc细胞系的迁移、侵袭能力及其可能分子机制,为子宫内膜异位症的治疗提供新思路。方法1、原代分离培养卵巢子宫内膜异位囊肿及正常对照的子宫内膜组织,并用Transwell-迁移、侵袭实验模拟体内细胞转移种植过程,比较子宫内膜癌ishikawa细胞系、EMs异位间质细胞(EcSCs)及异位腺体细胞(EcECs)、正常子宫内膜间质细胞(NSCs)及腺体细胞(NECs)的迁移及侵袭能力。2、MTT法筛选出甲氨蝶呤作用于HS 832.Tc细胞的时间及浓度。细胞计数法绘制四组浓度甲氨蝶呤作用下HS 832.Tc细胞的生长曲线。3、划痕愈合实验、Transwell-侵袭实验测定四组浓度甲氨蝶呤作用下HS832.Tc细胞迁移、侵袭能力。4、Western-blot半定量分析四组浓度甲氨蝶呤作用下HS 832.Tc细胞中NF-κB、MMP-9蛋白表达水平。结果1、ishikawa迁移数为110±4.9583个,EcSCs迁移数为108.6667±6.8849个,EcECs迁移数89.4667±3.6078个,NSCs迁移数61.8333±5.4144个,NECs迁移数41.6000±5.0419个。异位间质细胞与ishikawa细胞迁移数比较,差异无显著性意义(P﹥0.05)。异位间质及腺体细胞、正常间质及腺体细胞的迁移数两两比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。2、ishikawa侵袭数为148.3667±14.2017个,EcSCs侵袭数为143.8667±7.1281个,EcECs侵袭数99.5667±6.9762个,NSCs侵袭数73.6000±9.6726个,NECs侵袭数46.667±5.5481个。异位间质细胞与ishikawa细胞侵袭数比较,差异无显著性意义(P﹥0.05)。异位间质及腺体细胞、正常间质及腺体细胞的侵袭数两两比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。3、随着甲氨蝶呤作用浓度及时间的增加,HS 832.Tc细胞存活率降低。筛选出甲氨蝶呤浓度为0.88nmol/L,据此设置0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L四组浓度,作用时间为48小时。与未加药0nmol/L组生长曲线比较,0.1nmol/L组生长曲线与之几乎一致,1nmol/L组第5天开始增殖速度减慢(P<0.05),而10nmol/L组则在第2天开始增殖速度减慢(P<0.05),第4天增殖速度减慢极为显著(P<0.001)。4、0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L四组甲氨蝶呤作用48h后,划痕愈合面积(%)依次为95.78±8.06,88.70±2.32,80.82±2.11,68.78±9.76。划痕愈合面积两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。随着药物浓度增加,划痕愈合面积减小,呈负相关,r=-0.7607,P<0.01。5、0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L四组甲氨蝶呤作用48h后,HS 832.Tc细胞侵袭数依次为209.5000±13.2581个,184.5667±15.2764个,146.3333±12.6940个,111.7333±10.5010个,两两比较均有显著性差异(P<0.01)。侵袭细胞数随着药物浓度增加而减少,r=-0.8016,P<0.01。6、四组NF-κB蛋白表达水平两两比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。随着药物浓度增加,NF-κB蛋白表达水平降低,r=-0.7378,P<0.01。7、0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L及10nmol/L四组两两比较,浓度高者,MMP-9蛋白表达水平低,差异具有统计学意义(P<0.01),降低趋势与药物浓度负相关,r=-0.7210,P<0.01。结论1、异位子宫内膜间质细胞具有与ishikawa细胞相似的迁移、侵袭能力。异位子宫内膜细胞的迁移、侵袭能力强于正常子宫内膜细胞。间质细胞的迁移、侵袭能力强于腺体细胞。2、甲氨蝶呤可抑制HS 832.Tc细胞的增殖、迁移、侵袭能力,降低HS 832.Tc细胞中NF-κB、MMP-9蛋白表达水平,并呈浓度依赖性。3、小剂量甲氨蝶呤可能对子宫内膜异位症治疗有一定作用。