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人表皮生长因子受体2（Human epidermal growth factor receptor2，HER2）的表达水平与一些肿瘤的发生发展相关,其中约25%的乳腺癌患者HER2表达水平明显升高，因此，研制靶向HER2的抗体等制剂可以用于乳腺癌等肿瘤的诊断。卵黄抗体是从禽蛋中提取出来的IgY，相当于哺乳动物的与IgG。与IgG相比，IgY具有如下优点：1）不与哺乳动物Fc受体结合；2）不与G蛋白、A蛋白及类风湿因子结合；3）不激活补体。当用作诊断试剂时，IgY可以有效降低反应体系中的背景值及假阳性，显示出独有的应用空间。本课题的目的是利用基因工程重组人HER2胞外段蛋白（rHER2-ECD），通过免疫蛋鸡分别制备rHER2-ECD特异性血清抗体和卵黄抗体，为卵黄抗体的制备搭建实验平台。首先，我们将编码HER2-ECD的基因克隆入pET-28a质粒载体，并用IPTG诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达rHER2-ECD，经SDS-PAGE电泳及Tanon软件分析HER2-ECD的表达量不足10%，且以包涵体形式表达。然后，我们选择昆虫表达系统，通过克隆-亚克隆方法构建了含有重组HER2-ECD基因的杆状病毒，为后续在昆虫细胞中表达rHER2-ECD奠定了基础。为了尝试制备卵黄抗体，我们利用镍亲和层析法从大肠杆菌中将诱导表达的rHER2-ECD纯化出来，经初步电泳及Western blot鉴定后，用rHER2-ECD免疫蛋鸡，收取蛋鸡的血清和鸡蛋，从蛋黄中提取卵黄抗体，以间接ELISA进行检测。结果显示：卵黄抗体持续时间比血清抗体长；卵黄抗体能在体外识别高表达HER2的肿瘤细胞。我们的结果提示，真核基因在大肠杆菌中表达水平低可能与密码子偏爱性有关，卵黄抗体的制备可以成为廉价、高水平制备检测抗体的有效技术平台。