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第一部分电针刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位能够抑制缺血性脑卒中后神经细胞凋亡目的:探究在曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位的电针治疗是否减少缺血性脑卒中后的神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。方法:72只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、大脑中动脉梗阻再灌注组(MCAO)、电针组(EA)。电针治疗部位是大鼠右侧患肢的曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位,在大脑中动脉梗阻24h后开始,每日1次,连续3天。缺血再灌注72h后进行神经功能缺损评估,随后每组各取6只大鼠进行TTC染色评估脑梗死体积,每组各取6只大鼠进行TUNEL染色来比较每组TUNEL阳性细胞百分比,每组各取6只大鼠用于western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Cleaved caspase-3,Bim,Bcl-2的表达,其余大鼠用于免疫组化检测分析Caspase-3,Bim,Bcl-2的表达。结果:缺血再灌注72h后,MCAO组神经功能缺损评分明显高于sham组(P<0.01),而EA组神经功能缺损程度低于MCAO组(P<0.05)。假手术组大鼠无脑梗死体积。而MCAO组大鼠脑梗死体积明显高于EA组(P<0.05)。MCAO组TUNEL阳性细胞数量百分比明显高于sham组(P<0.01)。EA组较MCAO组TUNEL阳性细胞数量百分比明显减少(P<0.01)。western blot检测结果表明,MCAO组的caspase-3(P<0.05)、cleaved-caspase-3(P<0.01)、Bim(P<0.01)表达量高于sham组,Bcl-2(P<0.01)表达量低于sham组;而EA组caspase-3(P<0.05)、cleaved-caspase-3(P<0.01)、Bim(P<0.01)表达水平低于MCAO组,Bcl-2表达高于MCAO组(P<0.05)。免疫组化检测结果表明,电针治疗显著抑制了缺血性脑损伤导致的大脑皮层caspase-3、cleaved-caspase-3、Bim的阳性细胞数量的升高,逆转了缺血性脑损伤所致Bcl-2阳性细胞数量的下调(P<0.01)。结论:电针刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)这两个穴位能够降低I/R大鼠的神经功能缺损评分,减少脑梗阻面积和大脑皮层细胞的凋亡。说明电针能够抑制缺血性脑卒中后的神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。第二部分电针刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位能够调节PTEN,ERK信号通路目的:探究以曲池(LI11)和足三里(ST36)为刺激穴位的电针治疗是否能通过PTEN,ERK信号通路和Midkine(MK)发挥神经保护作用。方法:36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、大脑中动脉梗阻再灌注组(MCAO)、电针组(EA)。电针治疗部位是右侧患肢的曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位,在大脑中动脉梗阻24h后开始,每日1次,连续3天。局部脑缺血再灌注72h后每组各取6只大鼠用于western blot检测p-PTEN,p-PDK1,p-GSK-3β,Thr308,Ser473,tAkt,MK,p-ERK1/2,p-JNK,p-P38,ERK1/2,JNK,P38蛋白的表达;每组各选6只大鼠用于免疫组化检测MK的表达。结果:MCAO组p-PTEN、Ser473表达水平较sham组显著增加,而Thr308、p-PDK1和p-GSK-3β水平较sham组显著降低(P<0.01)。然而,在EA组与MCAO组相比,p-PTEN、Ser473的表达水平明显降低(P<0.01),p-PDK1、p-GSK-3β、Thr308的表达水平明显增高(P<0.01)。t-Akt蛋白水平在三组之间无明显差异(P>0.05)。MCAO组p-ERK1/2、p-P38、p-JNK的蛋白表达量较Sham组明显升高(P<0.01)。而EA组的p-ERK1/2(P<0.01)、p-JNK(P<0.05)、p-P38(P<0.05)的表达高于MCAO组。三组间ERK1/2、JNK、P38表达无差异(p>0.5)。western blot和免疫组化分析显示,三组间MK表达水平存在显著差异。MCAO组(P<0.01)和EA组(P<0.01)MK的表达均较sham组明显升高。EA组大鼠MK水平明显高于MCAO组(P<0.01)。结论:大鼠脑缺血再灌注损伤后,电针刺激曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位可通过影响PTEN和ERK信号通路及MK的表达,从而发挥神经保护作用。