中药何首乌是蓼科多年生草本植物何首乌(polygonum multiflorum thumb)的干燥块根,味苦甘涩,性微温,归肝、肾经。临床上何首乌的运用具有显著生熟异治的特点。何首乌可解毒、消痈、润肠通便;制何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发等功效,制何首乌自古以来,便常以乌发的功效被收录于各个药方中。研究已表明,炮制可使何首乌的生理活性成分发生显著的改变,其功效的变化或与其炮制前后化学成分及其含量的变化有关。制何首乌乌发作用的产生,是否确与其炮制前后某种含量发生了改变的成分有关,究竟与何种成分有关以及其乌发机制尚待研究确定。目的:探究制何首乌各分离部位、何首乌炮制前后含量改变的主要单体对酪氨酸酶活性及mRNA表达量的影响;探究制何首乌水提物及制何首乌主要单体成分大黄素、二苯乙烯苷可否通过Nrf2-ARE通路提高细胞的抗氧化损伤能力,推测其保护黑素/黑素干细胞免于氧化损伤的潜在能力。方法:选用制何首乌各分离部位、何首乌炮制前后含量改变的主要单体成分利用多巴速率氧化法进行细胞外的酪氨酸酶活性影响实验;利用多巴速率氧化法及多巴染色法分别检测制何首乌各成分对B16F10细胞内的酪氨酸酶活性;利用RT-PCR检测制何首乌各成分对B16F10细胞内酪氨酸酶mRNA表达的影响;利用DPPH自由基清除实验检测制何首乌提取物及主要单体成分细胞外的抗氧化能力;利用荧光素酶检测法对制何首乌提取物及主要单体成分对HepG2-ARE细胞内ARE(抗氧化反应元件)报告基因表达影响进行测定。结果:从受试药物中未筛选出显著激活酪氨酸酶活性的成分,而制何首乌水提物、制何首乌乙醇提取物的50%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、大黄素等皆表现出了一定的酪氨酸酶抑制活性。通过检测制何首乌水提物、制何首乌粗多糖及2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、大黄素对细胞内的酪氨酸酶活性影响实验发现,各成分均不同程度地轻微抑制酪氨酸酶活性,与细胞外酶活性影响结果趋势相一致;制何首乌各成分在受试浓度范围内对酪氨酸酶表达量均无显著影响。DPPH自由基清除实验结果发现制何首乌水提物、二苯乙烯苷细胞外均有一定抗氧化作用,测定各受试物对HepG2-ARE基因表达的影响,发现制何首乌水提物在100～400 μg/ml、二苯乙烯苷在15～60 μg/ml范围内能够显著激活ARE的表达起到抗氧化作用,且作用呈现短时性,大黄素在低浓度时也能够呈现一定的抗氧化作用。结论:实验结果暂不支持制何首乌通过影响细胞中酪氨酸酶的表达或活性发挥乌发功效,制何首乌中是否存在其他成分抑或经体内代谢后的成分可激活酪氨酸酶的活性及表达尚待研究;制何首乌或可通过Nrf2-ARE通路的激活保护黑素或黑素干细胞免于氧化损伤从而延缓衰老,有待进一步研究确定。