实时定量RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者bcr-abl mRNA水平

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目的:建立定量检测慢性粒细胞白血病(CML)患者bcr-abl mRNA的方法;探讨定量检测CML微小残留病变(minimal residual disease,MRD)的临床意义。方法:采用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time quantitative RT-PCR,RQ-PCR)及巢式RT-PCR方法检测36例CML患者bcr-abl mRNA;并用细胞遗传学方法检测Ph染色体。对其中18例行异基因外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)治疗的CML患者进行连续检测。结果:1. RQ-PCR的灵敏度达50拷贝bcr-abl。2. RQ-PCR结果:36例CML患者中,有34例测出bcr-abl融合基因,阳性率为94.4%,其中的30例初治患者bcr-abl/GAPDH水平介于0.025~10.255,中位数为2.946;其中可供分析的15例患者移植后3个月bcr-abl/GAPDH的中位表达水平(0.091)比治疗前(1.317)明显下降,其差异有统计学意义(P<0.01)3.巢式RT-PCR检测结果:在36例CML患者中,有33例测出bcr-abl融合基因,阳性率为91.6%;对18例经Allo-PBSCT术后患者进行检测,其中16例术后6个月全部转为阴性。4.细胞遗传学结果:36例患者中,34例可检出Ph染色体,阳性率为94.4%,18例Ph+阳性的CML患者经Allo-PBSCT术后经细胞遗传学检查,3个月后Ph染色体全部转阴。结论:RQ-PCR是一种种敏感的、可靠的方法,可定量检测CML bcr-abl mRNA,但不同CML患者白血病细胞的bcr-abl mRNA表达水平有较大差异;RQ-PCR监测bcr-abl mRNA可以有效观察CML患者行Allo-PBSCT治疗前后bcr-abl mRNA水平变化;RQ-PCR法是监测CML患者Allo-PBSCT治疗后MRD的一种较好的方法。
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