论文部分内容阅读
目的:对乙酰氨基酚(APAP)是最常用的口服镇痛药和解热药,但服用过量后会导致肝中毒,严重则发展为肝功能衰竭。目前,临床治疗对乙酰氨基酚肝毒性的药物有限。现已证实氧化应激是对乙酰氨基酚肝毒性的重要诱因之一。因此,具有较强抗氧化活性的化合物可能具有减弱对乙酰氨基酚肝毒性的能力。圣草酚是分布于中草药和果蔬中的黄酮类化合物,具有显著的抗氧化和抗炎活性。然而,圣草酚是否能够减弱对乙酰氨基酚肝毒性尚未见报道。本课题旨在探讨圣草酚减弱对乙酰氨基酚肝毒性的作用及其作用机制。方法:1.通过腹腔注射,静脉注射,灌胃三种给药途径研究圣草酚减弱小鼠对乙酰氨基酚肝毒性的作用。2.利用微粒体孵育法,酶代动力学,在体肠灌流模型研究圣草酚的代谢机理。3.通过药代动力学-药效动力学模型(PK-PD),UGTs的化学抑制剂,及UGTIAs敲低鼠(Ugtl+/-)确证葡萄糖醛酸化代谢在圣草酚减弱对乙酰氨基酚肝毒性上的作用。4.采用探针底物孵育法,生物化学指标试剂盒及TUNEL染色研究圣草酚的肝保护作用机制。结果:1.腹腔注射以及静脉注射圣草酚显著地减弱小鼠对乙酰氨基酚肝毒性,而灌胃给药圣草酚未见保护作用。2.圣草酚不经过细胞色素450酶(CYP450)及磺基转移酶(SULTs)代谢,而主要经肝脏和肠道的葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)代谢,并生成两个单葡萄糖醛酸代谢物。UGTIAs(主要为 UGTIA1、UGTIA9、UGT1A10)和 UGT2B7 是圣草酚葡萄糖醛酸化代谢的主要亚型。3.PK-PD研究显示,圣草酚减弱对乙酰氨基酚的肝毒性时,其血浆浓度显著地大于代谢产物。给予UGTs的化学抑制剂甘草次酸后,圣草酚的口服相对生物利用度及肝保护作用显著地增加。Ugtl+/-小鼠中,灌胃给药圣草酚显著地减弱对乙酰氨基酚的肝毒性,而在野生型小鼠并未观察到保护作用。结果表明,葡萄糖醛酸化代谢降低圣草酚在对乙酰氨基酚肝毒性上的保护作用。4.圣草酚通过抑制小鼠中介导对乙酰氨基酚毒性代谢物生成的Cyp2el和Cyp3all活性;提高谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽-S-转移酶活性(GST),提高肝脏谷胱甘肽(GSH)水平;增强超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)水平;和减少肝细胞凋亡等作用共同减弱对乙酰氨基酚肝毒性。结论:本研究表明圣草酚具有显著的减弱对乙酰氨基酚肝毒性的作用;圣草酚的葡萄糖醛酸化代谢降低其肝保护作用;其肝保护作用的机制与抑制对乙酰氨基酚的毒性代谢物的生成,缓解谷胱甘肽的消耗及减少氧化应激有关。