小麦、玉米中DON气相色谱检测方法的建立及OTA单克隆抗体免疫亲和柱的研制

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和赭曲霉毒素A(OTA)均为主要污染谷物及其制品的真菌毒素。DON具有广泛的细胞毒性和致畸性,其主要产生菌是镰刀菌(Fusarium)。赭曲霉毒素A(OTA)具有肾毒性、肝毒性、致畸性和免疫毒性,其主要产生菌为曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicllium)的某些菌种。由于DON和OTA危害严重,对可能污染有这两种真菌毒素的谷物及其制品进行检测是必要的。 我国用于检测DON的国家标准方法仅有TLC和ELISA两种,而目前GC—ECD和GC—MS法是国际上公认检测DON最灵敏的方法。因此,建立用于小麦、玉米等谷物中DON检测的GC方法不仅可实现我国检测DON与国际检测方法接轨,而且可弥补我国在这方面研究的不足。 利用抗OTA单克隆抗体制成的免疫亲和柱具有灵敏度高、选择性好、耗时少、使用方便、节省溶剂等优点,正成为OTA分析前处理中的一种重要的净化手段。目前我国对此类产品的需求完全依赖于进口。因此,研制出具有自主知识产权的OTA的单抗免疫亲和柱不仅可以填补我国在这方面研究的空白,而且可替代国外相应产品,改变我国对这类产品的需求完全依赖进口的状况。 本研究建立了DON的气相色谱检测方法,并用此法测定了22个小麦样品与20个玉米样品中DON的含量;研制了OTA单抗免疫亲和柱,并将其与HPLC联用测定了15个谷物样品中OTA的含量。现将研究结果分述如下: 1 建立了小麦、玉米中DON的气相色谱检测方法 小麦样品和玉米样品用乙腈—水(84:16,V/V)提取,小麦样品用硅镁型吸附剂柱净化,玉米样品用硅镁型吸附剂柱和活性炭柱二步净化,用N-七氟丁酰咪唑衍生,
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