pGEX4T-2-PTK重组质粒的构建、表达及表达条件优化

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目的:信号转导是一个十分精细、复杂的过程,参与细胞的增殖、分化、成熟和凋亡的每一个过程.在正常情况下,Abl-酪氨酸蛋白激酶(protein tyrosine kinase,PTK)参与信号转导,而Abl-PTK的过量表达,将会导致细胞的转化、癌变,常见于慢性髓性白血病和急性淋巴细胞白血病.因此寻找酪氨酸蛋白激酶抑制剂,用做信号转导的调节子,打破PTK的过量表达、抑制细胞转化,恢复其正常的调节功能有着重要的意义.结论:酶切鉴定和核苷酸序列测定结果证明了pGEX4T-2-PTK重组质粒的正确性和外源基因序列的可靠性.诱导表达产物经SDS-PAGE检测在相对分子量约58KD处有特异的蛋白带.并优化出融合蛋白表达的最佳条件,使蛋白的表达量占有菌体总蛋白的40﹪.结论:该实验为一下步进行GST-PTK融合蛋白纯化,鉴定PTK的活性,奠定了基础.
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