【摘 要】
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目的:观察二烯丙基二硫化物(Diallyl disulfide,DADS)提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV)/丙氧鸟苷(GCV)系统对晶状
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目的:观察二烯丙基二硫化物(Diallyl disulfide,DADS)提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV)/丙氧鸟苷(GCV)系统对晶状体上皮细胞的杀伤作用及旁观者效应,并初步探讨其作用机制。
方法:
1)将DADS稀释成10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L及100μmol/L后,分别加入到N/N1003A细胞及N/N1003A-TK细胞中,用MTT法检测细胞增殖及细胞免疫组化法检测连接蛋白Cx43的表达。
2)将DADS诱导组和未诱导组的N/N1003A-TK细胞和N/N1003A细胞,按N/N1003A-TK细胞占总细胞的不同比例(0、10%、20%、40%、80%、100%)混合,培养24小时后加入GCV,5天后用MTT法检测细胞增殖情况。
结果:
1)100μmol/LDADS孵育后的N/N1003A-TK细胞,体积变小、部分细胞皱缩、崩解。且随天数的增加,细胞的存活率明显下降,在第7天仅有32%的细胞存活。
2)N/N1003A细胞及N/N1003A-TK细胞Cx43的表达经DADS诱导后明显增强,尤其是在50μmol/L时其表达最强。
3)随N/N1003A-TK细胞比例的逐渐增加,DADS诱导组与未诱导组存活细胞百分比逐渐降低,两组差异有显著性(P<0.05)。且DADS和HSV-TK/GCV系统对细胞的杀伤作用在细胞混合比例为10%时开始出现协同关系。
结论: DADS可能通过诱导晶状体上皮细胞Cx43的表达来提高HSV-TK/GCV自杀基因系统旁观者效应。
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